М И Н И СТ Е РСТ В О О Б РА ЗО В А Н И Я И Н А У К И РО ССИ Й СК О Й Ф Е Д Е РА Ц И И В О РО Н Е Ж СК И Й ГО СУ Д А РСТ ...
6 downloads
122 Views
417KB Size
Report
This content was uploaded by our users and we assume good faith they have the permission to share this book. If you own the copyright to this book and it is wrongfully on our website, we offer a simple DMCA procedure to remove your content from our site. Start by pressing the button below!
Report copyright / DMCA form
М И Н И СТ Е РСТ В О О Б РА ЗО В А Н И Я И Н А У К И РО ССИ Й СК О Й Ф Е Д Е РА Ц И И В О РО Н Е Ж СК И Й ГО СУ Д А РСТ В Е Н Н ЫЙ У Н И В Е РСИ Т Е Т
ХИ М И К О -Т О К СИ К О ЛО ГИ ЧЕ СК И Й А Н А ЛИ З Н А ГРУ П П У В Е Щ Е СТ В , И ЗО ЛИ РУ Е М ЫХ ЭК СТ РА К Ц И Е Й И СО РБ Ц И Е Й . Н А РК О Т И ЧЕ СК И Е И Д РУ ГИ Е О Д У РМ А Н И В А Ю Щ И Е СРЕ Д СТ В А У ч ебно-м ет оди ч ес кое пос оби е для с т удент ов пос пеци аль нос т и 060108 – Ф арм аци я
В оронеж 2004
2
У т верж д ен о н а у чн о-м етод ическим ф а ку ль тет а , п ротокол № 3 от 11.05.2004 г.
советом
ф а рм а цевтического
Сост а вит ели: а сс. Е вст игн еева В.П. а сс., к.б.н . Ш ку т ин а И.В. а сс., к.ф .н . Бреж н ева Т .А. п роф ., д .ф .н . Сливкин А.И. п роф ., д .х.н . Селем ен ев В.Ф.
Пособие п од гот овлен о н а ка ф ед ре а н а лит ической хим ии хим ического ф а ку ль тет а Ворон еж ского госу д а рст вен н ого у н иверсит ет а Реком ен д у ет ся д ля ст у д ен т ов 4 и 5 ку рсов д н евн ого отд елен ия ф а рм а цевтического ф а ку ль т ет а .
3
Cодержание ВВЕ ДЕ НИЕ ………………………………………………………………………….4 ОБЩ ИЕ ВОПРОСЫ Пон ятие о вещ ест ва х, вы зы ва ю щ иход у рм а н ива н ие……………………………..5 Особен н ости хим ико-т оксикологического а н а лиза н а сод ерж а н ие од у рм а н ива ю щ ихсред ст в.……………………………………………6 Особен н ости ин т ерп рета ции резу ль та т ов п ри а н а лизе биологических объ ект ов н а сод ерж а н ие вещ ест в, вы зы ва ю щ иход у рм а н ива н ие.……………….9 ОБЪ Е К Т Ы ИССЛ Е ДОВАНИЯ Пра вила от бора п роб н а обн а ру ж ен ие н а ркот ическихсред ст в, п сихот роп н ы хи д ру гихтоксическихвещ ест в ………………………………… 10 Осм от робъ ект ов исслед ова н ия и оп ред елен ие н екоторы хсвойст в……………15 Х а ра кт ерист ика биологическихобъ ект ов. Пробоп од гот овка ………………….16 Э К С Т РАК Ц ИЯ К АК М Е Т ОД ИЗОЛ ИРОВАНИЯ НАРК ОТ ИЧ Е С К ИХ И ОДУ РМ АНИВАЮ Щ ИХ СРЕ ДСТ В Осн овн ы е п он ятия экст ра кции ……………………………………………………20 Осн овн ы е количествен н ы е ха ра кт еристики п роцесса экст ра кции …………...22 Влиян ие ра зличн ы хф а кт оров н а п роцесс экст ра кции ………………………….23 Т верд оф а зн а я экст ра кция …………………………………………………………24 Ж ид кост ь -ж ид кост н а я экстра кция ……………………………………………… 25 Т ОНК ОСЛ ОЙ НАЯ Х РОМ АТ ОГ РАФИЯ В АНАЛ ИЗЕ ВЕ Щ Е СТ В, ВЫ ЗЫ ВАЮ Щ ИХ ОДУ РМ АНИВАНИЕ Прин цип м етод а ……………………………………………………………………26 К а чест вен н ы й и количест вен н ы й а н а лиз м етод ом тон кослойн ой хром а тогра ф ии …………………………………………………………………...27 НЕ НАПРАВЛ Е ННЫ Й АНАЛ ИЗНАРК ОТ ИЧ Е СК ИХ И ОДУ РМ АНИВАЮ Щ ИХ ВЕ Щ Е С Т В Ан а лиз н еизвестн ы хобра зцов …………………………………………………….30 Т С Х -скрин ин г вещ ест в кислот н ого и осн овн ого ха ра кт ера ………………… 31 Х ИМ ИК О-Т ОК С ИК ОЛ ОГ ИЧ Е СК ИЙ АНАЛ ИЗОТ ДЕ Л ЬНЫ Х Г РУ ПП НАРК ОТ ИЧ Е СК ИХ И ОДУ РМ АНИВАЮ Щ ИХ ВЕ Щ Е СТ В (НАПРАВЛ Е ННЫ Й АНАЛ ИЗ) Производ н ы е ба рбит у ровой кислоты …………………………………………… 32 Алка лоид ы гру п п ы оп ия ………………………………………………………… 33 Производ н ы е 1,4-бен зод иа зеп ин а ………………………………………………. 35 Производ н ы е ф ен отиа зин а ……………………………………………………… 36 К а н н а бин оид ы …………………………………………………………………… 37 К ока ин ………………………………………………………………………………38 Ам ит рип тилин ……………………………………………………………………39 Дим ед рол …………………………………………………………………………...40 Пром ед ол …………………………………………………………………………...41 Э ф ед рин , эф ед рон ………………………………………………………………… 41 Л ИТ Е РАТ У РА ……………………………………………………………………43 ПРИЛ ОЖ Е НИЕ ……………………………………………………………………44
4
ВВЕ ДЕ НИЕ У п от реблен ие н а ркот иков ст а ло од н ой из а кт у а ль н ы х п роблем соврем ен н ого общ ест ва . Х а ра кт ерн ой чертой оборот а н а ркот ическихсред ст в в России является зн а читель н ое ра сш ирен ие их а ссортим ен т а вслед ст вие п оявлен ия м н огочислен н ы х лега ль н ы х м ед ицин ских п реп а ра тов и ин т ен сиф ика ции кон тра ба н д н ы х п ост а вок. При этом у величива ется д оля н еза кон н о п роизвод им ы х вы сокотоксичн ы х син т етических кон тра ба н д н ы х п оста вок. У гроза зд оровь ю и ж изн и лю д ей у су гу бляет ся ра сп ростра н ен ием виру са ВИЧ вслед ст вие а н тиса н ит а рн ого вн у т ривен н ого введ ен ия н а ркотиков; ра ст ет число д етей с т яж елы м и за болева н иям и и серь езн ы м и у м ст вен н ы м и и ф изическим и н ед ост а т ка м и, рож д а ем ы м и м а терям и, у п от ребляю щ им и н а ркотические сред ст ва . Неза кон н ое п роизвод ст во и оборот н а ркот иков, а т а кж е злоу п от реблен ие им и, соп ровож д а ем ы е п рот ивоп ра вн ы м и д ействиям и, созд а ю т у грозу д ля зд оровь я и ж изн и лю д ей, н а н осят серь езн ы й у щ ерб экон ом ике, п од ры ва ю т н ра вст вен н ы е осн овы общ ест ва . Од н им из сред ст в госу д а рст ва в борь бе с н а рком а н ией являет ся а н а литическа я слу ж ба , осу щ ест вляю щ а я хим ико-токсикологический а н а лиз сред ст в, вы зы ва ю щ их од у рм а н ива н ие, п озволяет кон тролирова т ь у головн о н а ка зу ем ы е д еян ия и сп особст ву ет эф ф ект ивн ой д иа гн остике и лечен ию боль н ы хн а рком а н ией. Сп ециф ика борь бы с н еза кон н ы м оборотом н а ркот иков т ребу ет д ля д остоверн ого вы ясн ен ия всех обстоятель ст в д ела п ривлечен ие сп ециа листов ра зн ы х п роф илей: крим ин а лист ов, хим иков-т оксикологов, вра чей-н а ркологов. Од н им из реш а ю щ их н а п ра влен ий п ри этом являет ся п ровед ен ие су д ебн ом ед ицин ского обслед ова н ия п од озрева ем ы х с цель ю у ст а н овлен ия ф а кта у п от реблен ия н а ркот иков, резу ль т а т ы которого во м н огом за висят от ла бора торн ого исслед ова н ия биологическихп роб обслед у ем ого. На ст оящ ее у чебн о-м ет од ическое п особие п освящ ен о од н ом у из ра зд елов ку рса “Т оксикологическа я хим ия” – хим ико-токсикологическом у а н а лизу н а ркотических и од у рм а н ива ю щ их сред ст в. В п особии ра ссм отрен а кла ссиф ика ция н а ркот ических сред ств, д а н а ха ра кт ерист ика объ ектов исслед ова н ия, обсу ж д а ю тся особен н ост и хим ико-т оксикологического а н а лиза од у рм а н ива ю щ ихсред ст в, м ет од ы ихизолирова н ия и обн а ру ж ен ия.
5
О Б Щ И Е В О П РО СЫ П онятиео вещ ест вах , вы зы ваю щ их одурм анивание На рком а н ия и т оксиком а н ия с м ед ицин ской т очки зрен ия ра ссм а т рива ю т ся ка к болезн ь , п ричин ой кот орой являет ся у п от реблен ие сред ст в, вы зы ва ю щ их за висим ост ь (п сихическу ю , а ин огд а и ф изическу ю ) м еж д у ж ивы м орга н изм ом и хим ическим вещ ест вом . П сихич е ска я з а висим ост ь – состоян ие, п ри кот ором н а ркотик (од у рм а н ива ю щ ее вещ ест во) вы зы ва ет чу вст во у д овлет ворен ия и которое т ребу ет п ериод ического или п остоян н ого п рием а н а ркот ика с цель ю п олу чен ия у д оволь ствия или во избеж а н ие н еп рият н ы хп сихическихощ у щ ен ий. Ф из ич е ска я з а висим ост ь – а д а п т а ция, п роявляю щ а яся в силь н ом ф изическом ра сстройст ве п ри за д ерж ке п рием а н а ркот ика . Да н н ое ра сстройст во (син д ром а бстин ен ции) скла д ы ва ет ся из оп ред елен н ого м н ож ест ва сим п том ов и п ризн а ков п сихического или ф изического свойст ва , ха ра кт ерн ы хд ля ка ж д ого вид а н а ркот иков. Сред ст ва , вы зы ва ю щ ие од у рм а н ива н ие, п од ра зд еляю т ся на н а ркотические сред ства и токсиком а н ические сред ст ва , в т ом числе сред ст ва , вы зы ва ю щ ие лека рст вен н у ю за висим ость . Т ерм ин “н а ркот ическое сред ст во” сод ерж ит в себе т ри крит ерия: м ед ицин ский, социа ль н ы й и ю рид ический. Он и вза им освяза н ы и в п ра вовом а сп ект е обязы ва ю т п ризн а ва т ь сред ство н а ркотическим т оль ко п ри ед ин ст ве т рех крит ериев, а им ен н о: м едицин ского, если соот вет ст ву ю щ ее сред ство ока зы ва ет сп ециф ическое д ейст вие н а Ц НС, что и являет ся п ричин ой его н ем ед ицин ского п рим ен ен ия; социа льн ого, если его н ем ед ицин ское п рим ен ен ие п рин им а ет м а ссовы е м а сш т а бы , п риобрет а ю щ ие социа ль н у ю зн а чим ост ь , и юридич е ского, если, исход я из д ву хвы ш еу ка за н н ы хкрит ериев, М З ст ра н ы п ризн а ло это сред ст во н а ркот ическим и вклю чило его в сп исок н а ркотическихсред ст в. В слу ча е от су т ст вия хот я бы од н ого из крит ериев од у рм а н ива ю щ ее сред ст во отн осится к сред ст ва м , вы зы ва ю щ им т оксиком а н ию или лека рст вен н у ю за висим ост ь . Кла ссифика ция н а ркот ич е скихи одурм а н ива ющихве ще ст в 1. Алка лоид ы гру п п ы оп ия (м орф ин , код еин , н а ркотин , п а п а верин и их син тет ические п роизвод н ы е: героин (д иа цетилм орф ин ), д ион ин (эт илм орф ин ), п ром ед ол). 2. Производ н ы е ба рбит у ровой кислот ы (ф ен оба рбит а л, ба рба м ил, бу т оба рбит а л, эт а м ин а л н а т рия). 3. Производ н ы е 1,4-бен зод иа зеп ин а (хлорд иа зеп оксид , д иа зеп а м , окса зеп а м , н итра зеп а м ).
6
4. Производ н ы е ф ен отиа зин а (а м ин а зин , д ип ра зин , левом еп ром а зин , т иорид а зин ). 5. К а н н а бин оид ы (ка н н а бид иол, ка н н а биол, т етра гид рока н н а бин ол, т етра гид рока н н а бин олова я кислот а ). 6. Фен ила лкила м ин ы (эф ед рин , эф ед рон , а м ф ет а м ин , м ета м ф ет а м ин ). 7. К ока ин . 8. Г а ллю цин оген ы (Л С Д, п силоцибин , м еска лин , ф ен циклид ин ). 9. Э тиловы й сп ирт. 10. Ра ст ворители (бен зин , а цет он , т рихлорэт илен , эф иры , хлороф орм ). 11. Вт оростеп ен н ы е п сихостим у лят оры (н икот ин , кола , ка т , коф еин ). К он вен цией ООН п о борь бе с н еза кон н ы м оборотом н а ркотических сред ст в и п сихот роп н ы хвещ ест в и Резолю цией Г ен ера ль н ой Асса м блеи ООН п о воп росу о м еж д у н а род н ом сотру д н ичест ве в борь бе с н еза кон н ы м оборотом и ра сп рост ра н ен ием н а ркот ических и п сихот роп н ы х сред ст в реком ен д ова н о ст ра н а м -у ча ст н ица м взят ь п од свой кон троль : 1) п роизвод ст во, изготовлен ие, склон ен ие к у п от реблен ию , п ред лож ен ие с цель ю п род а ж и, ра сп ростра н ен ие, п род а ж у , п ост а вку н а лю бы х у словиях, п осред н ичест во, п ереп ра вку , т ра н зит н у ю п ереп ра вку , т ра н сп орт ировку , им п орт или эксп орт лю бого н а ркотического сред ст ва или н а ркотического вещ ест ва ; 2) ку ль т ивирова н ие оп ийн ого м а ка , кока ин ового ку ста , кон оп ли (ин д ийской, ю ж н ой м а н ь чж у рской или ю ж н ой чу йской) либо д ру гих за п рещ ен н ы х к возд елы ва н ию н а ркотикосод ерж а щ ихку ль т у р в целяхп роизвод ст ва н а ркот ическихсред ст в в н а ру ш ен ии п олож ен ий К он вен ции ООН; 3) изгот овлен ие, т ра н сп ортировку , ра сп ростра н ен ие и п род а ж у обору д ова н ия и п олу п род у кт ов д ля п роизвод ст ва н а ркотическихсред ст в. От вет ст вен н ост ь за п ра вон а ру ш ен ия, связа н н ы е с н а ркот ика м и, в Российской Фед ера ции регла м ен тиру ет ся У головн ы м код ексом , К од ексом РФ об а д м ин истра тивн ы х п ра вон а ру ш ен иях, Г ра ж д а н ским код ексом , а т а кж е К од ексом о бра ке и сем ь е и Ж илищ н ы м код ексом РФ. О собенности х им ик о-т ок сик ол огическ ого анал иза на содержаниеодурм аниваю щ их средств Ц е лью а н а лиз а н а ркот ических и д ру гих од у рм а н ива ю щ их сред ст в являет ся у ст а н овлен ие ф а кт а п рису т ст вия н а ркотических и д ру гих од у рм а н ива ю щ ихсред ст в н еза висим о от т яж ест и сост оян ия, т.е. от н а йд ен н ого количест ва вещ ества . Гла вн а я з а да ч а а н а лиз а – ид ен т иф ика ция сред ст в, вы зы ва ю щ их од у рм а н ива н ие. В а н а лизе н а ркотических и д ру гих од у рм а н ива ю щ их сред ст в су щ ест ву ю т д ва осн овн ы х н а п ра влен ия: су д ебн оп ра вовое (у ст а н овлен ие ф а кт а п рису т ст вия, у п от реблен ия) и клин ическое (д иа гн остика , лечен ие, реа билита ция). При су д ебн о-п ра вовой н а п ра влен н ости вещ ест во а н а лизиру ет ся ка к м ин им у м д ву м я м ет од а м и, п ричем од ин из эт их м ет од ов исп оль зу ет ся д ля п ред ва ритель н ого исслед ова н ия, а д ру гой – д ля п од т верж д а ю щ его исслед ова н ия.
7
От личит ель н ой особен н ост ь ю Х Т А, вы д еляю щ ей его из д ру гих вид ов а н а лиза , является оп ред елен ие экзоген н ы х вещ ест в в объ ект а х, которы е п о своей п рирод е весь м а ра зн ообра зн ы . Объе кт ы , п од верга ем ы е а н а лизу , м ож н о ра зд елит ь н а след у ю щ ие гру п п ы : – биологические обра зцы (м оча , кровь , волосы , н огти, вн у т рен н ие орга н ы , д иа лиза ты , п ром ы вн ы е вод ы ); – обра зцы ра стит ель н ого п роисхож д ен ия (кон оп ля, оп иу м ), ихэкстра кт ы и п роизвод н ы е; – т верд ы е су бст а н ции (п орош ки); – та блет ки, д ра ж е; – ин ъ екцион н ы е ра ст воры . К осн овн ы м эт а па м ХТА сред ст в, вы зы ва ю щ их од у рм а н ива н ие, от н осятся: – за борп роб и хра н ен ие биом а т ериа ла ; – п робоп од готовка ; – п ред ва рит ель н ы е и п од т верж д а ю щ ие м ет од ы а н а лиза ; – обра бот ка и ин т ерп рет а ция п олу чен н ы хрезу ль т а т ов. В силу сп ециф ики а н а лиза н а сод ерж а н ие н а ркотических и д ру гих од у рм а н ива ю щ их вещ ест в (сокры тие ф а кт а у п от реблен ия, ф а ль сиф ика ция п роб и т.д .) в осн ову его м ет од ологии п олож ен м ет од скрин ин га , исп оль зу ем ы й п ри н ен а п ра влен н ом а н а лизе, т.е. п ри а н а лизе н а н еизвест н ое вещ ест во. При а н а лизе известн ого вещ ест ва , т.е. п ри н а п ра влен н ом а н а лизе, п рим ен яю т ся ча ст н ы е м етод ики оп ред елен ия. На д еж н ост ь резу ль т а тов а н а лиза , п олу чен н ы х с п ом ощ ь ю скрин ин га , оп ред еляет ся: – п ра виль н ост ь ю орга н иза цион н ы хм ероп риятий (отборп робы , хра н ен ие п роб, п ост оян н ы й кон т роль за ра ботой обору д ова н ия, чистот ой реа ген тов и д р.); – чу вст вит ель н ост ь ю и сп ециф ичн ость ю исп оль зу ем ы хм ет од ов; – зн а н ием п рирод ы вещ ест ва , сп особов введ ен ия в орга н изм , ра сп ред елен ия в орга н изм е, ст еп ен и м ета болизм а , п у т ей вы вед ен ия, а т а кж е ин д ивид у а ль н ы м и особен н ост ям и орга н изм а . Вы бор а н а литическихм етод ов д ля скрин ин га од у рм а н ива ю щ ихсред ст в оп ред еляет ся цель ю а н а лиза – д обить ся м ин им у м а отрица т ель н ы хи м а ксим у м а п олож ит ель н ы х резу ль т а т ов – и связа н с т а ким и гла вн ы м и п а ра м етра м и а н а лиза , ка к чу вст вит ель н ост ь и сп ециф ичн ост ь , т а к ка к эт им и п а ра м етра м и оп ред еляет ся н а личие лож н оотрица т ель н ы х и лож н оп олож ит ель н ы х резу ль т а т ов соот ветст вен н о. Чувст вит е льн ост ь а н а литического м етод а оп ред еляется ка к от н ош ен ие сигн а ла а н а лизиру ем ого вещ ест ва к сигн а лу ба зовой лин ии и вы ра ж а ет ся в н а н огра м м а х н а м иллилитр (н г/м л) или в гра м м а х н а килогра м м (г/кг) биообъ ект а . Под спе цифич н ост ью м етод а п он им а ю т сп особн ост ь м етод а отлича т ь хим ическу ю ст ру кт у ру д а н н ого соед ин ен ия от ем у п од обн ы х(а н а логов).
8
В ка чест ве осн овн ы х пре два рит е льн ы х скрин ин говы х м е т одов д ля обн а ру ж ен ия сред ст в, вы зы ва ю щ иход у рм а н ива н ие, исп оль зу ю т ся хим ические (хром оген н ы е, м икрокрист а ллические реа кции), им м у н охим ические м етод ы (ИФА, ПФИА, РИА и д р.) и т он кослойн а я хром а т огра ф ия. В ка чест ве подт ве рж да ющихм е т одов исслед ова н ия исп оль зу ю т ся Г Ж Х , ВЭ Ж Х , Г Х /М С. Под т верж д а ю щ ие м етод ы д олж н ы бы т ь вы ш е или ра вн ы м и п о чу вст вит ель н ост и, чт обы у м ен ь ш ит ь количест во лож н оотрица т ель н ы х резу ль т а т ов, н о обяза т ель н о д олж н ы бы т ь вы ш е п о сп ециф ичн ост и, д ля т ого чт обы сн изит ь количест во лож н оп олож ит ель н ы хрезу ль т а т ов. Т а блица Сра вн ен ие п реим у щ ест в и н ед ост а т ков н екот оры ха н а лит ическихм етод ов Преим у щ ест ва
Нед оста т ки
Им м у н охим ические м етод ы 1. Объ ект ивн ост ь резу ль т а т ов 1.Перекрест н о реа гиру ю щ ие вещ ест ва 2. Х орош а я чу вст вит ель н ост ь м огу т д а ть лож н оп олож ит ель н ы й 3. Полу количест вен н а я оцен ка резу ль т а т 4. Простота вы п олн ен ия 2.Г ру п п овой м етод н е ра злича ет ин д ивид у а ль н ы х соед ин ен ий вн у т ри 5. У м ерен н а я ст оим ость реа ген т ов гру п п ы , что п ривод ит к ча стичн ом у 6. Бы строта а н а лиза сокры тию п олн ого н а бора вещ ест в Х ром а тогра ф ические м етод ы 1. Х орош а я чу вст вит ель н ост ь 1.Т ребу ет ся вы сококва лиф ицирова н 2. Вы сока я сп ециф ичн ост ь н ы й п ерсон а л 3. К оличест вен н ое оп ред елен ие 2. Отн осит ель н а я д лит ель н ость а н а лиза 3. Ин огд а за висит от су бъ ект ивн ой ин т ерп рета ции резу ль т а т ов При вы боре а н а литического м ет од а н еобход им о у читы ва т ь его п реим у щ ест ва и н ед оста т ки, а та кж е вид а н а лизиру ем ого обра зца и обстоят ель ст ва д ела . Но д а ж е п ри исп оль зова н ии са м ого чу вст вит ель н ого м ет од а , резу ль т а т ы скрин ин га д олж н ы бы т ь п од т верж д ен ы а н а литическим и м ет од а м и, осн ова н н ы м и н а д ру гихф изико-хим ическихп рин цип а х. Тре бова н ия , пре дъя вля е м ы е к ра бот е ла бора т орий, з а н им а ющихся а н а лиз ом н а ркот ич е скихи другиходурм а н ива ющихве ще ст в 1. Л а бора т ория д олж н а п ройт и вн еш н ее п роф ессион а ль н ое т естирова н ие и бы т ь а тт естова н а . 2. К а ж д ы й хим ик-эксп ерт д олж ен д ока за т ь свой п роф ессион а ль н ы й у ровен ь . 3. К а ж д ы й п риборд олж ен им ет ь ин стру кцию п о эксп лу а т а ции.
9
4. Все исп оль зу ем ы е реа ген т ы д олж н ы им ет ь от м ет ку о д а т е изготовлен ия и п а сп ортизова н ы . 5. К а ж д ы й эт а п м ет од ики д олж ен бы т ь п од робн о оп иса н и им ет ь м ет рологическу ю оцен ку (восп роизвод им ост ь , п ред ел обн а ру ж ен ия, лин ейн ост ь и д р.). 6. Исп оль зу ем ы е эт а лон н ы е вещ ест ва д олж н ы бы т ь п а сп орт изова н ы . 7. Долж н ы бы т ь извест н ы п ред елы обн а ру ж ен ия а н а лизиру ем ы х вещ ест в п о ка ж д ом у исп оль зу ем ом у а н а лит ическом у м ет од у . 8. Пра вила от бора и хра н ен ия обра зцов д олж н ы бы т ь регла м ен тирова н ы . 9. К а ж д ы й п олож ит ель н ы й резу ль т а т д олж ен бы т ь п од т верж д ен д ру гим а н а литическим м етод ом . Исклю чен ие м ож ет бы т ь сд ела н о т оль ко в слу ча е н а п ра влен н ого а н а лиза . О собенности интерп ретац ии резул ьт атов п ри анал изебиол огическ их объ ек т ов на содержаниевещ еств, вы зы ваю щ их одурм анивание Исп оль зу я п олу чен н ы е резу ль т а т ы , а н а литик-т оксиколог д олж ен н е т оль ко п од т верд ит ь или оп ровергн у т ь п ред п олож ен ие о п рису т ст вии од у рм а н ива ю щ его сред ст ва в а н а лизиру ем ом обра зце, н о и ра злича т ь слу ча и хрон ического и ра зового исп оль зова н ия н а ркотических вещ ест в. Послед н его м ож н о д ост ичь , если соп оста вит ь кон цен т ра ции обн а ру ж ен н ого вещ ест ва и его м ет а болитов. К а к п ра вило, более вы сокие кон цен т ра ции м ета болитов свид ет ель ст ву ю т о хрон ическом п рим ен ен ии, а зн а читель н ое п ревы ш ен ие кон цен тра ции вещ ест ва н а д кон цен тра цией м ет а болит а – об остром отра влен ии (ра зовом у п от реблен ии). Для п ра виль н ой ин терп рета ции резу ль т а т ов а н а лиза ва ж н о зн а н ие ф орм ы и сп особа введ ен ия. Вн у т ривен н ое введ ен ие или ин га ляция в н а ча ль н ы й м ом ен т д а ю т более вы сокие кон цен тра ции вещ ества в крови, чем вн у т рим ы ш ечн ое, ора ль н ое, п од кож н ое. В слу ча е а н а лиза т ру п н ого м а териа ла ра вн ы е кон цен тра ции, обн а ру ж ен н ы е в п ечен и и крови, свид етель ст ву ю т о хрон ическом исп оль зова н ии вы соких д оз н а ркотических вещ ест в. В слу ча е острого от ра влен ия кон цен т ра ция а н а лизиру ем ого вещ ест ва в п ечен и зн а читель н о п ревы ш а ет кон цен т ра цию его в крови. Вы сокие кон цен тра ции од у рм а н ива ю щ ихсред ст в в крови н а ра н н ем эта п е п осле вн у т ривен н ого или ора ль н ого введ ен ия бу д у т соот вет ст вова т ь более вы соким кон цен тра циям в легкихи п ечен и, в то врем я ка к в п ериод вы вед ен ия кон цен тра ция в ж елчи и м оче бу д ет вы ш е, чем в крови. Од у рм а н ива ю щ ие сред ст ва осн овн ого ха ра кт ера д а ю т сра вн ит ель н о н изкие кон цен тра ции в крови, а отн ош ен ие кон цен тра ций в п ечен и и в крови ча ст о вы ш е 10. С оед ин ен ия кислого ха ра кт ера д а ю т у м ерен н о вы сокие кон цен тра ции в крови, и эт о от н ош ен ие н а ход ится в п ред ела хот 2 д о 5. Для вещ ест в н ейтра ль н ого ха ра кт ера н а блю д а ю т ся вы сокие кон цен тра ции в крови и п очт и од ин а ковое сод ерж а н ие в д ру гихтка н ях.
10
Для коррект н ой ин т ерп рета ции п олу чен н ы хд а н н ы х т а кого биообъ ект а , ка к м оча , н еобход им о т а кж е зн а н ие д озы , врем ен и, сп особа и п ериод ичн ости введ ен ия вещ ест ва , кин ет ики ра сп ред елен ия, од н а ко в слу ча е н а ркотиков п од обн а я ин ф орм а ция ред ко д ост у п н а и н е всегд а п олн а . Од н а ко м ож н о от м етит ь н екоторы е за кон ом ерн ост и: 1. Ч ем вы ш е введ ен н а я д оза , т ем боль ш е вероят н ост ь ихобн а ру ж ен ия. Вы сокие д озы обы чн о д а ю т более вы сокие кон цен т ра ции в п ла зм е и м оче. 2. К он цен тра ция вещ ест ва в п ла зм е за висит от его ра сп ред елен ия в орга н изм е, м ета болизм а и вы вед ен ия. Для ка ж д ого вещ ест ва его ф а рм а кокин етика ин д ивид у а ль н а . К он цен т ра ция н а ркот ическихвещ ест в в м оче ва рь иру ет ся п о сра вн ен ию с п ла зм ой и за висит от объ ем а и рН м очи. 3. К а ж д ое вещ ест во сохра н яет ся в орга н изм е ра зн ое врем я и за висит от хим ического ст роен ия и ча стот ы у п от реблен ия. 4. Посколь ку кон цен т ра ция боль ш ин ст ва вещ ест в в м оче (за исклю чен ием эт а н ола ) н е коррелиру ет с ихкон цен тра цией в крови и ст еп ен ь ю н а ркотического возд ейст вия, врем я у п от реблен ия н а ркотического вещ ест ва п о кон цен тра ции в м оче н е м ож ет бы т ь у ст а н овлен о. О Б ЪЕ К Т Ы И ССЛЕ Д О В А Н И Я П равил а от бора п роб на обнаружениенарк отическ их средств, п сих отроп ны х и других т ок сическ их вещ еств Резу ль т а т ы исслед ова н ия во м н огом за висят от точн ости соблю д ен ия м ет од ики п робоотбора биологических объ ект ов, у словий хра н ен ия и т ра н сп орт ировки. На ст а д ии п робоотбора в а н а лизе н а ркот ических вещ ест в след у ет у чит ы ва т ь возм ож н ост ь у н ичт ож ен ия или ф а ль сиф ика ции объ екта ; а н а лизиру ем а я п роба м ож ет бы т ь м а ла п о м а ссе, за грязн ен а и им еть хим ический сост а в, отличн ы й от п ервон а ча ль н ого из-за возд ейст вия окру ж а ю щ ей сред ы п ри н еп ра виль н ом хра н ен ии. Докум е н т а льн ое оформ ле н ие хим ико-т оксикологич е ских иссле дова н ий. Осн овн ы м д оку м ен т ом “ка бин ета ”, осу щ ест вляю щ его эксп ерт изу оп ь ян ен ия, а т а кж е от бор биологических п роб д ля хим ико-т оксикологического исслед ова н ия, является ра бочий ж у рн а л ка бин ета эксп ерт изы оп ь ян ен ия. Ж у рн а л являет ся ю рид ическим д оку м ен том , бу д у чи п рош н у рова н н ы м и оп еча т а н н ы м , за п олн яет ся и вед ет ся п о у ст а н овлен н ой ф орм е. В ж у рн а ле обяза тель н о д олж н ы бы т ь у ка за н ы ФИО боль н ого, н ом ер м ед ицин ской ка рт ы ст а цион а рн ого или а м бу ла т орн ого боль н ого или н ом ер а кта м ед ицин ского освид ет ель ст вова н ия, д а та и врем я исслед ова н ия (н а ча ло и окон ча н ие исслед ова н ия), а т а кж е все оп ера ции, п ровед ен н ы е с исслед у ем ой п робой, н а осн ова н ии которы х д а ет ся за клю чен ие о н а хож д ен ии или от су т ст вии т оксического вещ ест ва в исслед у ем ой п робе. При количествен н ом исслед ова н ии в ж у рн а ле за п исы ва ю т п ока за н ия п риборов и объ ем а исслед у ем ы хобъ ект ов.
11
На всеххром а т огра м м а х, сп ект рогра м м а хи д ру гихд оку м ен т а хд олж н ы бы т ь п рост а влен ы ФИО боль н ого, н ом ер м ед ицин ской ка рт ы ст а цион а рн ого или а м бу ла т орн ого боль н ого или н ом ер а кт а м ед ицин ского освид ет ель ст вова н ия, д а т а и врем я исслед ова н ия. Первичн ы й д оку м ен т без у ка за н н ы ха трибу т ов н е м ож ет слу ж ит ь осн ова н ием д ля за клю чен ия о хим икот оксикологическом исслед ова н ии. В ж у рн а ле регистра ции хим ико-токсикологических исслед ова н ий за п исы ва ю т резу ль т а т ы а н а лиза н а осн ова н ии за п исей в ра бочем ж у рн а ле. При за п олн ен ии ж у рн а ла регистра ции хим ико-токсикологических исслед ова н ий след у ет соблю д а ть общ ие п ра вила вед ен ия д оку м ен т а ции т а кого род а : за п иси п роизвод ят ся ш а риковой или п ерь евой ру чкой; за п рещ а ю т ся за п иси ка ра н д а ш ом , а та кж е ру чка м и с кра сн ы м и и зелен ы м и черн ила м и; за п рещ а ется исп оль зова н ие п рочерков или ка вы чек в гра ф а х “Да та ”, “Врем я”, “ФИО”, “Резу ль т а т”, исклю чен ие сост а вляет гра ф а “Врем я” п ри исслед ова н ии од н ой и т ой ж е п робы н а н есколь ко гру п п вещ ест в; в гра ф е “Объ ект исслед ова н ия” у ка зы ва ю т количест во взятого н а исслед ова н ие объ ект а и обяза т ель н о д ела ю т п ом ет ки в слу ча ях н а ру ш ен ия п ра вил отбора биологических п роб; в гра ф е “М ет од и н а йд ен н ы е величин ы ” п осле у ка за н ия м етод а за п исы ва ю т зн а чен ия ф изико-хим ических п а ра м етров вещ ест в; в гра ф е “Резу ль т а т “ за п исы ва ю т н а зва н ие обн а ру ж ен н ого (или н е обн а ру ж ен н ого) вещ ест ва или гру п п ы вещ ест в (в соот вет ст вии с п рин ятой н ом ен кла ту рой), а т а кж е кон цен т ра ции н а йд ен н ы х вещ ест в в ед ин ица хизм ерен ия “СИ”. Ну м ера ция а н а лизов сквозн а я н еза висим о от числа ж у рн а лов и н а чин а ется от 0 ч 00 м ин 1 ян ва ря и за ка н чива ется в 24 ч 00 м ин 31 д ека бря ка ж д ого год а . За од ин н ом ер (ед ин ицу исслед ова н ия) п рин им а ю т исслед ова н ие н а вещ ест во или гру п п у вещ еств, которы е ид ен тиф ициру ю т ся од н им реа ктивом , п рибором или м ет од ом . Резу ль т а т ы исслед ова н ия н а а лкоголь за п исы ва ю тся отд ель н ы м н ом ером н еза висим о от вы явлен ия в п робе д ру гих вещ ест в; исп ра влен ия в гра ф а х “Врем я”, “ФИО”, ”Резу ль т а т” н ед оп у ст им ы , в слу ча ях ош ибочн ы х за п исей т екст а кку ра т н о за черкива ет ся, скреп ляет ся п од п ись ю исслед ова вш его и ряд ом вн осит ся н ова я за п ись . Резу ль т а т ы хим ико-т оксикологического исслед ова н ия оф орм ляю т ся а кт ом , которы й вы д а ет ся н а ру ки или вы сы ла ется п очт ой п о за п росу н а п ра вивш его у чреж д ен ия, о чем д ела ет ся соот вет ст ву ю щ а я за п ись в ж у рн а ле регист ра ции хим ико-т оксикологических исслед ова н ий. Акт п од п исы ва ется лица м и, п ровод ивш им и исслед ова н ие, и за веряется гла вн ы м вра чом . К оп ия а кт а хра н ит ся в ла бора т ории. “На п ра влен ие на хим икоС опроводит е льн а я докум е н т а ция : т оксикологическое исслед ова н ие” и “Сп ра вка о д ост а вке п роб н а хим икот оксикологическое исслед ова н ие” за п олн яю т ся п о у ст а н овлен н ы м ф орм а м и п еред а ю т ся в хим ико-токсикологическу ю ла бора торию (Х Т Л ) вм ест е с п роба м и. На п ра влен ие н а хим ико-т оксикологическое исслед ова н ие ост а ет ся в Х Т Л , являет ся гла вн ы м д оку м ен т ом , н а осн ова н ии кот орого Х Т Л п ровод ит хим икот оксикологический а н а лиз и вы д а ет резу ль т а т ы о сод ерж а н ии или отсу т ст вии
12
а лкоголя в п робе п ред ст а вителям орга н ов зд ра воохра н ен ия. На п ра влен ие н а хим ико-токсикологическое исслед ова н ие п од п исы ва ет ся д еж у рн ы м вра чом и м ед сест рой (ф ель д ш ером ), п роизвод ивш им и отбор п роб, и хра н ит ся в Х Т Л в т ечен ие д ву хм есяцев. Сп ра вка о д ост а вке п роб н а хим ико-т оксикологическое исслед ова н ие вы д а ет ся лицу , осу щ ест вляю щ ем у т ра н сп орт ировку обра зцов и д оку м ен т а ции в Х Т Л , и слу ж ит д оку м ен т ом , у д остоверяю щ им п олн ом очия лица н а д ост а вку , а т а кж е сод ерж ит свед ен ия об от п ра вке и п олу чен ии обра зца . Сп ра вка сост а вляет ся в д ву х экзем п ляра х, п ервы й экзем п ляр ост а ет ся в Х Т Л , вт орой экзем п лярза веряет ся ш та м п ом Х Т Л и возвра щ а ет ся в “ка бин ет ”. В слу ча е когд а Х Т Л и “ка бин ет ” террит ориа ль н о ра сп ола га ю т ся в од н ом зд а н ии (од н ом боль н ичн ом ком п лексе) лечебн ого у чреж д ен ия, сп ра вка о д оста вке н е за п олн яется. П ра вила от бора жидкихбиосре д. М оч а . Процед у ра от бора п робы д олж н а п роизвод ит ь ся в у словиях, исклю ча ю щ их п од м ен у или за м ен у ее д ру гим и ж ид кост ям и. Проба м очи собира ет ся в п розра чн ы й ст еклян н ы й ш ирокогорлы й гра д у ирова н н ы й сосу д объ ем ом 300-600 м л. Объ ем п робы д олж ен бы т ь н е м ен ее 200 м л. После за верш ен ия п роцед у ры освид ет ель ст ву ем ы й п еред а ет сосу д с п робой п ерсон а лу . С осу д с п робой н а кры ва ет ся п окровн ой п ла стин ой (кры ш кой). Пред ва рит ель н ое исслед ова н ие п робы вклю ча ет : – изм ерен ие т ем п ера т у ры (н е более, чем через 4 м ин у т ы п осле отбора п робы ) стеклян н ы м рт у т н ы м т ерм ом ет ром ; – изм ерен ие величин ы рН с п ом ощ ь ю у н иверса ль н ой ин д ика т орн ой бу м а ги д ля оп ред елен ия рН м очи; – визу а ль н ое н а блю д ен ие (цвет, м у т н ост ь и т.п .). Т ем п ера т у ра д олж н а н а ход ит ь ся в п ред ела х32,5-37,7оС, рН м очи в н орм е д олж ен бы т ь в ин терва ле 4-8 ед . рН, визу а ль н о п роба д олж н а вы гляд еть ест ест вен н о. Е сли резу ль та т ы п ред ва рит ель н ого исслед ова н ия вы зы ва ю т п од озрен ие в ф а ль сиф ика ции, п ерсон а л обяза н п ровест и п овторн у ю п роцед у ру отбора п робы в у словиях, исклю ча ю щ ихф а ль сиф ика цию От обра н н у ю п робу м очи ра злива ю т в д ва ст еклян н ы хили п ла ст м а ссовы х герм етичн о за кры ва ю щ ихся сосу д а ем кост ь ю 100-150 м л ка ж д ы й. Кровь от бира ет ся п ри строгом соблю д ен ии а сеп тических у словий из п оверхн остн ой вен ы через иглу са м от еком в су хой п ен ициллин овы й ф ла кон , сод ерж а щ ий ра ст вор геп а рин а (3-5 ка п ель н а ка ж д ы е 10 м л крови). Фла кон т от ча с ж е за кры ва ю т ст а н д а ртн ой резин овой п робкой, ф иксиру ю т п робку , сод ерж им ое ф ла кон а сра зу ж е п ерем еш ива ю т . Для хим ико-т оксикологического исслед ова н ия н еобход им о н е м ен ее 10 м л крови, д ля исслед ова н ия толь ко н а н а личие а лкоголя д ост а точн о 2-3 м л крови. С люн а отбира ется в ст ериль н ы й су хой ф ла кон из-п од п ен ициллин а в количест ве 5 м л и ту т ж е за кры ва ет ся п робкой.
13
У всех ф ла кон ов с отобра н н ы м и п роба м и (м очи, слю н ы или крови) ф иксиру ю т п робки а лю м ин иевы м и колп а чка м и с п ом ощ ь ю п рисп особлен ия д ля обж им а колп а чков, обесп ечива ю щ его герм ет иза цию ф ла кон а , и ст а вят ихв холод иль н ик. В слу ча е герм ет иза ции д ру гим сп особом ф ла кон ы д олж н ы бы ть оп еча т а н ы . На ка ж д ы й ф ла кон н а клеива ет ся этикет ка с у ка за н ием н ом ера п робы (п о регистра цион н ой кн иге), д а т ы , врем ен и за бора п робы , ф а м илии освид ет ель ст ву ем ого, ф а м илии м ед ицин ского ра ботн ика , п од готовивш его п робу . Исслед ова н ие н а н а личие а лкоголя п ровод ится в т ечен ие 1 ча са п осле п олу чен ия биологических п роб. Доп у ска ет ся хра н ен ие п робы п ри у словии а сеп тического от бора в холод иль н ике п ри т ем п ера т у ре 0+2оС н е более су ток. При д лит ель н ом хра н ен ии биосред с н а ру ш ен ием т ем п ера т у рн ого реж им а в н их ра звива ю т ся брод иль н ы е и гн илостн ы е п роцессы , которы е м огу т су щ ест вен н о иска зит ь резу ль т а т ы количест вен н ого оп ред елен ия. Да н н ы е об отборе биологической п робы за н осят ся в ж у рн а л регист ра ции а н а лизов и их резу ль т а т ов. При эт ом у ка зы ва ю т ся: п оряд ковы й н ом ер, д а та и врем я взятия м очи, крови или слю н ы ; ф а м илия, им я, от чест во обслед у ем ого, год рож д ен ия, п ол; ф а м илия, им я, от чест во вра ча , п роизвод ивш его взят ие п робы крови (от ку д а взят а кровь и сп особ обра бот ки кож и), количест во взят ы хбиосред , д а та и врем я п еред а чи биосред н а а н а лиз, д а т а п ровед ен ия исслед ова н ия, резу ль т а ты исслед ова н ия. Склян ки, п робирки, п ред н а зн а чен н ы е д ля взят ия крови и м очи, м ою т ся 2% ра ст вором сод ы , оп ола скива ю т ся д ист иллирова н н ой вод ой и ст ерилизу ю т ся обы чн ы м сп особом . П ра вила от бора волос, н огт е й и пот ожировы х вы де ле н ий для хим икот оксикологич е ского иссле дова н ия н а н а лич ие н а ркот ич е ских сре дст в и психот ропн ы хве ще ст в. В олосы от бира ю т от д ель н о с лобн ой, т ем ен н ой, за т ы лочн ой, п ра вой и левой височн ы хобла стей волосистой ча ст и головы в вид е п у чка в количестве н е м ен ее 15-20 волос, которы е обреза ю т ся у корн я н ож н ица м и ка к м ож н о ближ е к кож е. При н еобход им ости отбира ю т обра зцы волос с д ру гих волосисты х у ча ст ков т ела . От обра н н ы е обра зцы волос п ом ещ а ю т ка ж д ы й в от д ель н ы й кон верт с соот вет ст ву ю щ ей н а д п ись ю , которы й за т ем оп еча ты ва ю т. Все п олу чен н ы е кон верты с обра зца м и п ом ещ а ю т в од ин общ ий кон верт, кот оры й оп еча ты ва ю т . Н огт и отбира ю т от д ель н о с ка ж д ой ру ки или, п ри н еобход им ости, с ка ж д ой н оги. Ногти обреза ю т ся н ож н ица м и п о возм ож н ост и ближ е к кож е. От обра н н ы е обра зцы н огт ей с ка ж д ой ру ки или н оги п ом ещ а ю т в от д ель н ы й кон верт с соответст ву ю щ ей н а д п ись ю , которы й за т ем оп еча ты ва ю т. Все п олу чен н ы е кон верты с обра зца м и п ом ещ а ю т в од ин общ ий кон верт , которы й т а кж е оп еча ты ва ю т . От бор обра зцов пот ожировы х вы де ле н ий н а ру ка х и д ру гих у ча ст ка х т ела п роизвод ится ва т н ы м т а м п он ом , см очен н ы м сп иртом . Вес та м п он а д олж ен сост а влят ь 400-500 м г п ри ра сход е эт а н ола д о 1 м л.
14
Да н н ы м т а м п он ом т щ а т ель н о п ротира ю т ся п оверхн ости ру к и лица (гла вн ы м обра зом вокру г рт а ), п осле чего т а м п он вы су ш ива ет ся н а возд у хе. Во избеж а н ие вза им оп еред а чи исслед у ем ы хвещ ест в с од н ого та м п он а н а д ру гой, ка ж д ы й из н их у п а ковы ва ю т в от д ель н ы й п олим ерн ы й п а кет, им ею щ ий соот вет ст ву ю щ у ю м а ркировку . Все п олу чен н ы е п а кет ы с обра зца м и п ом ещ а ю т в од ин общ ий кон верт, которы й оп еча ты ва ю т . П одгот овка обра з цов и докум ен т ов к т ра н спорт ировке в ХТЛ . Для от п ра вки биоп роб в Х Т Л готовятся д ва сосу д а , в кот оры х н а ход ит ся п роба биож ид кост и од н ого освид ет ель ст ву ем ого. Первы й – “обра зец” – п ред н а зн а чен д ля а н а лиза , вт орой – “кон т роль н ы й обра зец” – п о п рибы т ии в Х Т Л п ом ещ а ет ся н а хра н ен ие без н а ру ш ен ия у п а ковки и исп оль зу ет ся д ля п овторн ого а н а лиза п робы в слу ча е н еобход им ости: п ри п овт орн ой эксп ертизе, по требова н ию п ра воохра н итель н ы х орга н ов, п ри н еобход им ост и исп оль зова н ия более соверш ен н ы х м ет од ов а н а лиза и связа н н ой с эт им н еобход им ост и от п ра вки кон троль н ого обра зца в д ру гу ю Х Т Л и т.д . Для м а ркировки сосу д ов гот овят д ва “ярлы ка ”. На д п ись н а ярлы ке сод ерж ит ш естизн а чн ы й код обслед у ем ого (д ля код ирова н ия исп оль зу ет ся п роизволь н ы й ряд чисел от 0 д о 9, н а п рим ер: 008745 и т.д .), д а т у и код д а н н ого п у н кт а (п о общ ей сист ем е код ирова н ия “ка бин ет а ” и Х Т Л н а ркологических д исп а н серов и боль н иц). При этом ярлы к кон т роль н ого обра зца сод ерж ит бу кву “К ” п осле ш естизн а чн ого код а , а та кж е п од п ись освид етель ст ву ем ого н а оборотн ой ст орон е. За п олн ен н ы е ярлы ки д олж н ы леж а т ь н а д п ись ю вн из, когд а освид ет ель ст ву ем ы й п ригла ш а ет ся п ост а вит ь п од п ись н а од н ом из н их (кон т роль н ом ). Освид етель ст ву ем ы й н е д олж ен вид ет ь своего код а . Реком ен д у ет ся, чтобы за п олн ен ие ярлы ков п ровод илось лицом , от вет ствен н ы м за вед ен ие ра бочего ж у рн а ла “ка бин ет а ”. Во избеж а н ие п у та н ицы оборотн а я ст орон а ярлы ка кон троль н ого обра зца от м еча ет ся ка ким либо обра зом , н а п рим ер, цветн ы м ка ра н д а ш ом . Я рлы к креп ит ся к сосу д у с п ом ощ ь ю клейкой лен т ы т а к, чтобы лен т а п роход ила через д н о, бокову ю п оверхн ост ь и головку сосу д а , а н а д п ись ра сп ола га ла сь н а ст ен ке. М ест о соед ин ен ия кон цов лен ты н а головке сосу д а за лива ет ся су ргу чом , н а н ем д ела ется от т иск ш т а м п а “ка бин ета ”. Доп у ска ет ся исп оль зова н ие соврем ен н ы хн а д еж н ы хсред ст в д ля оп еча ты ва н ия. В слу ча е, если обслед у ем ы й н е согла сен с п ра виль н ост ь ю п роизвед ен н ого от бора п робы п ерсон а лом “ка бин ет а ”, он м ож ет: – ост а вит ь за п ись в ра бочем ж у рн а ле; – п отребова ть п овторн ого взятия п робы (безотла га тель н о); – сд ела т ь за явлен ие в вы ш естоящ ие орга н ы . Тра н спорт ировка обра з цов и докум е н т ов. Т ра н сп орт ировку обра зцов п роб с н а п ра влен иям и н а хим ико-т оксикологическое исслед ова н ие осу щ ест вляет лицо, н а им я кот орого сост а влен а сп ра вка о д ост а вке. Х Т Л н еза м ед лит ель н о у вед ом ляет ся об от п ра вке п роб и д оку м ен т а ции исп оль зова н ием т елеф он а , т елеф а кса или телегра ф а . Неза висим о от ст еп ен и у д а лен н ости обра зцы реком ен д у ет ся т ра н сп орт ирова т ь в кон т ейн ере-ящ ике, в кот оры й вм ещ а ет ся д оста т очн ое
15
количест во обра зцов. К а ж д ы й кон т ейн ер м а ркиру ет ся н ом ером и код овы м обозн а чен ием “ка бин ета ”. После у п а ковки обра зцов кон т ейн ер за кры ва ет ся кры ш кой, за п ира ется и за клеива ется бу м а ж н ой лен т ой. Л ен т а ра сп ола га ет ся т а ким обра зом , чт обы бы ло н евозм ож н о вскры т ь кон тейн ер без н а ру ш ен ия ее целостн ост и. Перевозка обра зцов в ж а ркое врем я год а п роизвод ит ся в су м ка ххолод иль н ика х. П е ре да ч а обра з цов и докум е н т ов в ХТЛ . В ла бора торию п робы м очи, крови и слю н ы п еред а ю т ся с н а п ра влен ием , в кот ором у ка за н ы п оряд ковы й н ом ер п робы (п о регистра цион н ой кн иге), н а им ен ова н ие, количест во, д а та и врем я взятия биосред , у словия хра н ен ия, цель а н а лиза , Ф.И.О. н а п ра вивш его вра ча , а д рес н а п ра вивш его у чреж д ен ия. При п олу чен ии обра зцов п роб в Х Т Л п роизвод ят н а ру ж н ы й осм отр целостн ост и у п а ковки. Доста влен н ы е обра зцы п роб вскры ва ет за вед у ю щ ий Х Т Л или от вет ст вен н ое лицо. Проверяет ся н а ру ж н а я у п а ковка обра зцов и соот вет ст вие за п исей н а ярлы ка х. Ра сп а кова н н ы е обра зцы п роб п еред а ю т п ерсон а лу Х Т Л д ля а н а лиза . Все свед ен ия п о п рием ке обра зцов регист риру ю т ся в ж у рн а ле регистра ции резу ль т а т ов хим ико-т оксикологических исслед ова н ий Х Т Л . К он троль н ы е обра зцы ст а вят н а хра н ен ие в за п ира ем ы е и оп еча ты ва ем ы е холод иль н ы е ш ка ф ы (п ри тем п ера т у ре –18оС) д ля возм ож н ы х кон троль н ы х исслед ова н ий в т ечен ие 2-хм есяцев со д н я п ост у п лен ия в Х Т Л . Е сли в т ечен ие эт ого срока отсу т ст вова ла н еобход им ост ь в п овт орн ом хим икот оксикологическом исслед ова н ии, т о п о ист ечен ии д ву х м есяцев обра зец у н ичт ож а ю т . При п роба х н е биологич е ского происхожде н ия (ра ст итель н ое сы рь е, п орош ки, т а блет ки, экст ра кт ы и д р.) н а веска д ля а н а лиза от бира ет ся п роизволь н о, если он а т оль ко н е оговорен а м етод икой и н е огра н ичен а м а лы м объ ем ом обра зца . Са м а я м а ла я п роба д олж н а бы ть п роа н а лизирова н а са м ы м и чу вст вит ель н ы м и м ет од а м и. К ритерием вы бора м ет од а в д а н н ом слу ча е являет ся п ред ел обн а ру ж ен ия вещ ест ва . Обра зцы н ебиологического п роисхож д ен ия, ка к п ра вило, изы м а ю т ся в п роцессе оп ера тивн о-след ст вен н ы х м ероп рият ий и являю т ся вещ ествен н ы м и д ока за тель ст ва м и. О см отр объ ек тов иссл едования и оп редел ениенек от оры х свойст в При осм от ре объ ект ов исслед ова н ия отм еча ю т вн еш н ий вид , цвет и за п а х д оста влен н ы хобра зцов. При п од готовке п робы к а н а лизу след у ет обра щ а т ь вн им а н ие н а вн е ш н ий вид д оста влен н ы х биообъ ект ов, кот оры й м ож ет слу ж ит ь ва ж н ой п од ска зкой п ри п ровед ен ии а н а лиза , н а п рим ер, изм ен ен ие цвет а сод ерж им ого ж елу д ка м ож ет бы т ь связа н о с от ра влен ием та ким и вещ ест ва м и, ка к п ерм а н га н а т ка лия – п у рп у рн ы й или розовы й цвет; соли м ед и – зелен ы й или голу бой; соли н икеля-зелен ы й;
16
соли коба ль т а – розовы й; кислот ы а зотн а я, п икрин ова я – ж елты й; кислот ы серн а я, солян а я, щ а велева я – цвет коф ейн ой гу щ и. При осм отре м очи т а кж е от м еча ю т н еобы чн ы й цвет и за п а х, кот оры е н а блю д а ю т ся п ри от ра влен иям и след у ю щ им и п реп а ра т а м и. К ра сн о-коричн евы й цвет им еет м оча п ри отра влен ии п роизвод н ы м и п ира зола , ф ен отиа зин а , ф ерроцерон ом , риф а д ин ом ; зелен о-син ий – ф ен олом , м етилен овой син ь ю ; ж елты й – ф ен а цет ин ом , вит а м ин а м и, п роизвод н ы м и н итроф у ра н а , п икрин овой кислотой. За п а хф иа лок н а блю д а ет ся п ри от ра влен ии скип ид а ром ; За п а х а цетон а – п ри отра влен ии изоп роп иловы м сп ирт ом , а цетон ом , у боль н ы хд иа бет ом . Ц ве т п реп а ра т а т а кж е м ож ет бы т ь п од ска зкой п ри его ид ен т иф ика ции. Ж елты е п реп а ра ты : п роизвод н ы е н итроф у ра н а , н евигра м он , н иф ед ип ин , н ит а зол, н о-ш п а , н иста т ин , м ерка п топ у рин , п ира зид ол, т ет ра циклин овы е а н т ибиотики, т а вегил, леворин , леп он екс, кот а рн ин , ку ра н т ил, рива н ол, п икрин ова я кислот а , ка лия бихром а т, ф у ра цилин … Ж елто-ора н ж евы е п реп а ра т ы : вит а м ин В2, ф олиева я кислота … Зелен ы е: ру т ин , бриллиа н това я зелен ь … Розовы й: вита м ин В12, розова т ы й – м а н ин ил. К ра сн ы е: п ервин иу м п а м оа т, ру бом ицин … К ра сн о-коричн евы е: риф а д ин , ф ерроцерон … Т ем н о-ф иолетовы й – ка лия п ерм а н га н а т . Ч ерн о-коричн евы й – иод . Необход им о от м етит ь , что кром е лека рст вен н ы х вещ еств в н екот оры е лека рст вен н ы е ф орм ы вход ят всп ом ога т ель н ы е вещ ест ва , кон серва н т ы , ст а билиза торы , которы е бы ва ю т д оба влен ы в зн а чит ель н ы хколичест ва х. Он и м огу т извлека т ь ся из биологического м а т ериа ла и п ри оцен ке резу ль т а т ов а н а лиза п ривод ит ь к ош ибочн ы м за клю чен иям . На п рим ер, в т а блетки м огу т вход ит ь гип с, ф осф а т ы , та ль к, ж ела тин , а га р, коллоид н ы е са лицила ты , м а н н итол и д р. За па х. Солод , м ен тол, м етилса лицила т, ка м ф ора , ксероф орм , н екоторы е вит а м ин ы , ф орм а лин , бен зин , керосин , а ром а т ические и хлорирова н н ы е у глевод ород ы , эф иры этилен гликоля обла д а ю т сп ециф ическим за п а хом . Фен олы , креозот им ею т ф ен оль н ы й за п а х; а цет он , хлороф орм – сла д кова ты й; а лиф а т ические сп ирт ы и ихэф иры – сп ирт овой, ф ру кт овы й за п а х. “Ра зд ра ж а ю щ ий ” за п а хха ра кт ерен д ля а зот н ой, солян ой, хлорн ой, у ксу сн ой, т рихлору ксу сн ой, м у ра вь ин ой кислот ; чесн очн ы й за п а х– д ля ф осф ора , т еллу ра , м ы ш ь яка . Харак теристик а биол огическ их объ ек тов. П робоп одгот овк а
17
На ст а д ии п робоп од гот овки обра зец очищ а ет ся от п рим есей и за грязн ен ий, которы е н е след у ет от бра сы ва т ь , т а к ка к он и м огу т бы ть ист очн иком д оп олн ит ель н ой ин ф орм а ции. Пробоп од гот овка – ст а д ия риска п от ерят ь а н а лизиру ем ое вещ ест во и объ ект . Поэтом у все п ред п рин им а ем ы е д ейст вия д олж н ы бы ть логически оп ра вд а н ы и н а п ра влен ы н а сохра н ен ие обра зцов, от обра н н ы хд ля а н а лиза , д ля д а ль н ейш его исслед ова н ия. М оч а – н а иболее ра сп ростра н ен н ы й объ ект исслед ова н ия н а лека рст вен н ы е токсичн ы е соед ин ен ия и н а иболее п рост ой биообъ ект д ля а н а лиза вслед ст вие н изкого сод ерж а н ия белковы хком п он ен т ов. Ва ж н ы м п ока за т елем м очи ка к биообь ект а являет ся рН, п оэт ом у ра бот а с н ей требу ет п ост оян н ого вн им а н ия к изм ен ен ию рН. Величин а рН м очи п овы ш а ется со врем ен ем из-за д ействия ба кт ериа ль н ой ф лоры , вы д еляю щ ей а м м иа к. Т а кое у величен ие м ож н о п ред от вра тит ь п у т ем хра н ен ия ее п ри п он иж ен н ы х тем п ера т у ра х (п ри а н а лизе очен ь ла биль н ы х вещ ест в – в за м орож ен н ом вид е). Необход им о у чит ы ва ть т а кж е, чт о п ри хра н ен ии м очи в холод иль н ике в н ей п роисход ит н овообра зова н ие эт а н ола д о кон цен тра ции 0,5 ‰ . При са ха рн ом д иа бет е н овообра зова н ие эт а н ола в м оче, хра н ящ ейся в холод иль н ике, д оход ит д о 1,1‰ . Вм ест е с тем след у ет п ом н ит ь , что п ри боль ш ом объ ем е возд у ш н ого слоя во ф ла кон е н а д кровь ю или м очой п роисход ит окислен ие а лкоголя и сн иж ен ие его сод ерж а н ия в объ ект е. Дейст вие ба кт ериа ль н ой ф лоры м ож н о за м ед лит ь д оба влен ием ф торид а н а т рия, борн ой кислот ы и д ру гихба кт ериоста т ическихп реп а ра тов, од н а ко н а д о у чит ы ва т ь их д а ль н ейш ее у ча ст ие в экст ра кции и обра зова н ии ф он а . М очу м ож н о лиоф илизирова т ь , п ред ва ритель н о п еревед я лету чие соед ин ен ия в соот вет ст ву ю щ ие соли. При а н а лизе м очи и д ру гих биологических объ ект ов н а сод ерж а н ие од у рм а н ива ю щ ихвещ ест в н еобход им о обра щ а т ь вн им а н ие н а п от ен циа ль н ы е ф он овы е соед ин ен ия ка к эн д оген н ого, т а к и экзоген н ого ха ра кт ера , п рису т ст вие кот оры хв а н а лизиру ем ом обра зце н еизбеж н о п ри лю бом сп особе п робоп од готовки. Из п от ен циа ль н ы х эн д оген н ы х соед ин ен ий н еобход им о отм ет ит ь п рису т ст вие н изком олеку лярн ы х п род у кт ов м ет а болизм а а м ин окислот и са ха ров (а м ин ы , м очевин а , ка рбон овы е кислоты , соли ка рбон овы х кислот и д р.), н еболь ш ихколичест в п еп т ид ов и са ха ров (в н орм е), ст ероид ов, п игм ен та у робилин а , окра ш ива ю щ его м очу в ж елты й цвет и д ру гихвещ ест в. К ф он овы м экзоген н ы м соед ин ен иям отн осят ся п род у кты биотра н сф орм а ции вещ ест в, п осту п ивш их с п ищ ей, и ра зличн ы х лека рст вен н ы х вещ ест в, исп оль зу ем ы х н а рком а н а м и д ля у силен ия н а ркотического эф ф ект а , сн ят ия син д ром а а бстин ен ции, см ягчен ия “вы ход а ” из состоян ия н а ркотического оп ь ян ен ия (ба рбит у ра т ы , п роизвод н ы е 1,4бен зод иа зеп ин а ), а т а кж е м ет а болит ы д ру гиххим ическихвещ ест в, п оп а вш ихв орга н изм (кра сит ели, а н тиоксид а н т ы , п род у кт ы т а ба коку рен ия и т.д .). На сод ерж а н ие эн д оген н ы хи экзоген н ы хком п он ен тов в п робе влияю т: возра ст , п ол и вес человека , оп ред еляю щ ие во м н огом ра сп ред елен ие яд а и его м ет а болизм ; 2) п а ра ллель н ое п рису т ствие д ру гих экзоген н ы х хим ических
18
вещ ест в (лека рст вен н ы е сред ст ва , коф еин , т а ба к, а лкоголь и д р.), изм ен яю щ их ф а рм а кокин етические и ф а рм а код ин а м ические п а ра м етры яд а ; 3) д иета – свобод н ы е ж ирн ы е кислот ы связы ва ю т ся с а ль бу м ин а м и и кон ку риру ю т н а эт а п е связы ва н ия яд а с белком ; 4) ген етический ф а кт ор – от д ель н ы е ин д ивид у у м ы обла д а ю т п овы ш ен н ой т олера н тн ост ь ю к д ейст вию н екоторы х хим ическиха ген тов; если д ля од н ихд оза введ ен н ого яд а является см ерт ель н ой, т о д ля д ру гихэт а ж е д оза от н осит ель н о безвред н а (или н е вы зы ва ет лет а ль н ого исход а ); 5) д ру гие ф а кторы , д ейст вие кот оры хн еобход им о п ред у см а т рива т ь , болезн ь (м ож ет д а т ь п овы ш ен н ы й ф он н екоторы х эн д оген н ы х соед ин ен ий), ра бот а с соед ин ен иям и бы т овой или ин д у ст риа ль н ой хим ии (п овы ш ен н ы й ф он эн д о- и экзоген н ы хвещ ест в). Пред а н а лит ическа я обра бот ка м очи м ож ет состоят ь из ра зличн ы х оп ера ций: п рям ое кон цен т рирова н ие (у п а рива н ие н екот орого количест ва м очи д о н еболь ш ого объ ем а н а вод ян ой ба н е либо роторн ом исп а рит еле), экстра кция ра ст ворит елям и, лиоф илиза ция, хром а т огра ф ическое ра зд елен ие или сорбция н а т верд ом сорбен те или ком бин а ция ра зличн ы хоп ера ций (кон цен трирова н ие – экст ра кция, лиоф илиза ция – экстра кция и д р.). Кровь. У ровен ь т оксическихвещ ест в и ихм ет а болитов у ж ивы хобъ ект ов и в крови т ру п а н еод ин а ков вслед ст вие биохим ическихизм ен ен ий. Сод ерж а н ие т оксического вещ ест ва в а рт ериа ль н ой или вен озн ой крови т а кж е бу д ет ра зличн ы м . Да ж е п олож ен ие тела у ж ивого п а циен т а – ст оя, сид я или леж а – влияет н а биохим ический сост а в п робы , т а к ка к в эт ом слу ча е м ен яет ся сод ерж а н ие белков в крови, чт о особен н о ва ж н о д ля т оксическихвещ ест в, в зн а чит ель н ой ст еп ен и связы ва ю щ ихся с белка м и. Обра бот ке экст ра кцией м ож ет бы т ь п од вергн у т а цель н а я кровь , п ла зм а или сы ворот ка . Е сли д ля п ред от вра щ ен ия сверты ва н ия крови исп оль зова лись а н т икоа гу лян т ы , то н еобход им о у читы ва т ь , чт о геп а рин вы т есн яет ж ирн ы е кислот ы из м ест ихсвязы ва н ия с а ль бу м ин ом . Э то влияет, с од н ой сторон ы , н а у величен ие связы ва н ия токсическихвещ ест в с белка м и, с д ру гой – н а п ереход ж ирн ы хкислот в орга н ический ра створит ель п ри экст ра кции. Для у м ен ь ш ен ия эн зим а тической а кт ивн ост и кровь реком ен д у ет ся хра н ить в холод иль н ике в за м орож ен н ом вид е. Посколь ку ст еклян н ы е ст ен ки п осу д ы сод ерж а т боль ш ое количест во свобод н ы хгид роксиль н ы хгру п п , возм ож н о связы ва н ие п олярн ы х т оксических соед ин ен ий ст ен ка м и п осу д ы за счет обра зова н ия вод ород н ой связи. Э то явлен ие особен н о ва ж н о у чит ы ва ть п ри а н а лизе след овы хколичест в вещ ест ва . Пред ва рит ель н ое силилирова н ие ст ен ок п осу д ы п озволяет свести это явлен ие к м ин им у м у . Аль т ерн а т ивой являет ся исп оль зова н ие п осу д ы из п олип роп илен а или т еф лон а , хот я п ри эт ом н еобход им о счит а т ь ся с за грязн ен ием п робы м он ом ера м и см олы . Из эн д оген н ы хсоед ин ен ий п ом им о ж ирн ы хкислот в экст ра кт а хиз крови вст реча ю т ся ра зличн ы е ст ероид н ы е горм он ы (т естост ерон и д р.), холестерин , кот оры е в крови н а ход ятся в связа н н ом состоян ии с п ротеин а м и п ла зм ы . При хра н ен ии крови более су т ок п ри ком н а тн ой т ем п ера т у ре п роисход ит н овообра зова н ие а лкоголя, д остига я кон цен тра ции 1‰ .
19
С люн а является п род у кт ом секреции ж елез ротовой п олост и. От обра н н у ю п робу цен т риф у гиру ю т и д ля хра н ен ия за м ора ж ива ю т , чт обы за м ед лить а кт ивн ост ь ф ерм ен тов. Х ра н ит ь лу чш е всего слю н у в склян ка хиз т еф лон а или п роп илен а , чт обы избеж а т ь п оглощ ен ия след овы х количест в а н а лизиру ем ого вещ ест ва ст ен ка м и стеклян н ой п осу д ы . У ст а н овлен о, что н еион изирова н н ы е ф орм ы т оксического вещ ест ва , н а ход ящ иеся в вод н ом ра ст воре п ла зм ы , п а ссивн о д иф ф у н д иру ю т в слю н у , т а к что су щ ест ву ет п рям а я за висим ость м еж д у кон цен т ра цией а н а лизиру ем ого вещ ест ва в слю н е и его кон цен т ра цией в крови. В олосы п ред ст а вляю т отн осит ель н о гом оген н ы й (с т очки зрен ия а грега т н ого сост оян ия) биологический су бстра т . Я вляясь легкод ост у п н ы м д ля от бора , он и п ред ст а вляю т зн а чит ель н ы й ин т ерес в ка чест ве объ ект а п ри п ровед ен ии хим ико-т оксикологического а н а лиза ка к н а н еорга н ические, т а к и н а орга н ические вещ ест ва . При а н а лизе волос н а ркот ики м огу т бы ть обн а ру ж ен ы в от д а лен н ы е сроки п осле окон ча н ия ихп рием а и в техслу ча ях, когд а а н а лиз биож ид костей д а ет от рица тель н ы й резу ль т а т . Исп оль зова н ие волос в ка чест ве объ ект а исслед ова н ия п озволяет п рослед ит ь д ин а м ику п ост у п лен ия н а ркот ического вещ ест ва в орга н изм человека . Ан а лиз волос д лин ой 6-8 см (6-8 м есяцев) п озволяет су д ит ь о ст еп ен и н а ркотической за висим ости. По сра вн ен ию с биож ид костям и, исслед ова н ие т верд ы х кож н ы х обра зова н ий им еет целы й ряд отличит ель н ы х особен н ост ей, кот оры е н а кла д ы ва ю т отп еча т ок н а все эт а п ы п ровед ен ия ра бот. Исслед ова н ие волос вклю ча ет в себя д ве п рин цип иа ль н о ва ж н ы е с т очки зрен ия ин терп рет а ции резу ль т а т ов ст а д ии: п ред ва ритель н ое исслед ова н ие п оверхн ости волос н а п рису т ст вие а н а лизиру ем ы х вещ ест в и п ровед ен ие очист ки у ка за н н ой п оверхн ости от м еш а ю щ их д а ль н ейш ем у исслед ова н ию вещ ест в с обяза тель н ой п роверкой эф ф ект ивн ости д а н н ой оп ера ции. К осн овн ы м м етод а м ра зру ш ен ия волос от н осят ся след у ю щ ие: экст ра кция орга н ическим и ра ст ворит елям и; кислот н ы й или щ елочн ой гид ролиз; эн зим а тическое ра зру ш ен ие; экст ра кция орга н ическим и ра ст ворит елям и п ри сверхкритических у словиях; т ерм ическое ра злож ен ие объ ектов. Ж е лч ь являет ся п род у кт ом секрет орн ой д еят ель н ости п ечен и, ж елчн ого п у зы ря и д вен а д ца т ип ерстн ой киш ки. Э та ж ид кост ь сод ерж ит боль ш ое количест во вод ы , эн д оген н ы х вещ ест в, п од обн ы х т ем , кот оры е н а ход ятся в крови, п ла зм е и сы ворот ке, а т а кж е ж елчн ы е кислот ы и п игм ен т ы . Ж елчь ра злича ет ся п о величин е рН (в п ред ела х6,7-8,3), чт о за ст а вляет кон т ролирова т ь рН в ход е п од готовки к экст ра кции, а п ри н еобход им ости исп оль зова ть п од ход ящ ий бу ф ер. Реком ен д у ет ся п робу т а кж е цен триф у гирова т ь п ри н изких скоростях (д ля у д а лен ия холест ерин а ) и оса д ит ь белки д оба влен ием см еси хлороф орм – м ет а н ол (2:1) или хлороф орм – изоп роп а н ол (9:2). П е ч е н ь п ред ст а вляет собой цен т ра ль н ы й орга н хим ического гом еоста за . В п ечен и н а ход ит ся боль ш ое ра зн ообра зие экзоген н ы хи эн д оген н ы хвещ ест в: п род у кт ы белкового, у глевод н ого, ж ирового обм ен ов, п род у кт ы биотра н сф орм а ции экзоген н ы х, в том числе токсических вещ ест в. С т очки
20
зрен ия п рису т ст вия эн д оген н ы хи экзоген н ы хвещ ест в в экст ра кт е из п ечен и эт от объ ект являет ся са м ы м н еу д обн ы м вслед ст вие ихболь ш ого ра зн ообра зия. Да ж е са м а я д литель н а я и м н огоэт а п н а я экст ра кция, н а п рим ер, кислы х лека рст вен н ы х сред ств д а ет в хлороф орм н ом экст ра кт е д о вось м и ра зн ообра зн ы хэн д оген н ы хсоед ин ен ий. ЭК СТ РА К Ц И Я К А К М Е Т О Д И ЗО ЛИ РО В А Н И Я Н А РО Т И ЧЕ СК И Х И О Д У РМ А Н И В А Ю Щ И Х СРЕ Д СТ В О сновны еп онятия эк страк ц ии В хим ико-т оксикологическом а н а лизе м етод экст ра кции ш ироко исп оль зу ет ся д ля изолирова н ия т оксических вещ ест в из объ ект ов биологического п роисхож д ен ия, д ля очист ки вы т яж ек из биологического м а т ериа ла от п рим есей, д ля вы д елен ия т оксическихвещ еств из п ред ва ритель н о очищ ен н ы х вы т яж ек, д ля кон цен т рирова н ия исслед у ем ы х вещ ест в, н а ход ящ ихся в силь н о ра зба влен н ы хра ст вора х. Э кст ра кция – п роцесс извлечен ия ра ст ворит елям и соот вет ст ву ю щ их вещ ест в из ра зличн ы х объ ект ов. Объ ект ы , из кот оры х извлека ю т соот вет ст ву ю щ ие соед ин ен ия, м огу т бы т ь т верд ы м и вещ ест ва м и или ж ид костям и. Поэтом у п роцессы изолирова н ия п од ра зд еляю т н а экст ра кцию в сист ем е т верд ое т ело – ж ид кост ь (т верд ож ид кост н а я экст ра кция) и н а экст ра кцию в сист ем е ж ид кост ь -ж ид кост ь (ж ид кост н а я экст ра кция). Э кст ра ге н т – орга н ический ра ст воритель , в ин д ивид у а ль н ом состоян ии или сод ерж а щ ий ка кие-либо реа ген т ы , извлека ю щ ий (экст ра гиру ю щ ий) д а н н ое вещ ест во из вод н ой ф а зы . В хим ико-токсикологическом а н а лизе м ет од т верд оф а зн ой экст ра кции п рим ен яет ся д ля изолирова н ия исслед у ем ы х вещ ест в из орга н ов т ру п ов, ра ст ен ий, п очвы и д ру гихобъ ект ов. При экст ра кции вещ еств в сист ем е т верд ое т ело–ж ид кост ь в ка чест ве экст ра ген тов п рим ен яю т орга н ические ра ст ворит ели. Для д а н н ой систем ы в ряд е слу ча ев исп оль зу ю т вы щ ела чива н ие. В ы ще ла ч ива н ие – извлечен ие ком п он ен т ов из т верд ы х т ел с п ом ощ ь ю вод ы . Ж идкост н а я экст ра кция – п роцесс ра сп ред елен ия ра ст ворен н ого вещ ест ва м еж д у д ву м я н есм еш ива ю щ им ися ж ид ким и ф а за м и, од н ой из кот оры хв боль ш ин ст ве слу ча ев является вод а , а второй – н есм еш ива ю щ ийся с вод ой орга н ический ра ст ворит ель . Э кст ра кцион н ы й ре а ге н т – сост а вн а я ча ст ь экст ра ген т а , вза им од ейст ву ю щ а я с извлека ем ы м вещ ест вом с обра зова н ием экст ра гиру ю щ егося соед ин ен ия. Э кст ра кт – отд елен н а я ж ид ка я орга н ическа я ф а за , сод ерж а щ а я экст ра гирова н н ое из вод н ой ф а зы вещ ест во. Р е экст ра кция – п роцесс обра тн ого извлечен ия вещ ест ва из экст ра кт а в вод н у ю ф а зу .
21
Р е экст ра ге н т – ра ст вор реа ген т а , исп оль зу ем ы й д ля извлечен ия вещ ест ва из экст ра кт а . Р е экст ра кт - отд елен н а я вод н а я ф а за , сод ерж а щ а я вещ ест во, извлечен н ое из экст ра кт а . Р а з ба вит е ль – отн осит ель н о ин ерт н ы й орга н ический ра ст ворит ель , п риба вляем ы й к экст ра ген т у д ля у лу чш ен ия его ф изических или экст ра кцион н ы хсвойст в. П ром ы вка – п роцесс ча стичн ого или п олн ого у д а лен ия п рим есей из экст ра кт а или реэкст ра кт а . П е риодич е ска я экст ра кция – экст ра кция вещ ест ва из од н ой и той ж е ф а зы , п ровод им а я от д ель н ы м и п орциям и экстра ген т а . Н е пре ры вн а я экст ра кция – экстра кция, п ровод им а я п ри н еп реры вн ом п ерем еш ива н ии од н ой ж ид кой ф а зы (д ру га я ж ид ка я ф а за ост а ет ся н еп од виж н ой). П рот ивот оч н а я экст ра кция – экст ра кция, осу щ ест вляем а я п ри вст речн ом д виж ен ии обеихф а з. В ла бора т орн ы х у словиях экст ра кцию обы чн о п ровод ят с п ом ощ ь ю д елит ель н ой ворон ки. В ворон ку п ом ещ а ю т исслед у ем ы й ра ст вор, сод ерж а щ ий ра ст ворен н ое вещ ест во, п од леж а щ ее экст ра гирова н ию , и н е см еш ива ю щ ийся с вод ой орга н ический ра ст ворит ель , кот оры м извлека ется экст ра гиру ем ое вещ ест во из вод н ого ра ст вора . Ворон ка эн ергичн о вст ряхива ет ся (обы чн о 2-5 м ин ). При эт ом обе ж ид кие ф а зы д исп ергиру ю т ся д ру г в д ру га , обра зу я ка п ли ра зличн ого ра зм ера . Э кстра гиру ем ое вещ ество через гра н ицу ра зд ела вод н ой и орга н ической ф а з п ереход ит из вод н ой ф а зы в орга н ическу ю д о т ехп ор, п ока в сист ем е н е н а ст у п ит м еж ф а зн ое ра вн овесие, п ри кот ором д ост ига ю тся ра вн овесн ы е кон цен т ра ции экст ра гиру ем ого вещ ест ва в вод н ой и в орга н ической ф а за х. При д остиж ен ии м еж ф а зн ого ра вн овесия скорость п ереход а ра ст ворен н ого вещ ест ва из вод н ой ф а зы в орга н ическу ю ст а н овит ся ра вн ой скорост и п ереход а того ж е вещ ест ва из орга н ической ф а зы в вод н у ю , т .е. осу щ ест вляется состоян ие д ин а м ического ра вн овесия. После п рекра щ ен ия вст ряхива н ия обе ж ид кие ф а зы ра ссла ива ю т ся, п ричем т ем бы стрее, чем боль ш е ра зн ица в п лотн ости вод ы (вод н ого ра ст вора ) и п рим ен яем ого орга н ического ра створит еля, п лот н ость которого м ож ет бы т ь ка к вы ш е, т а к и н иж е п лот н ости вод ы . Тре бова н ия , пре дъя вля е м ы е к орга н ич е ским ра ст ворит е ля м • Орга н ический ра ст ворит ель д олж ен обла д а т ь сп особн ость ю эф ф ект ивн о и п о возм ож н ости избира т ель н о извлека т ь экст ра гиру ем ое вещ ест во из исслед у ем ого ра ст вора . • Ра ст ворит ель д олж ен м а ло ра ст ворять ся в вод е и м а ло ра ст ворят ь вод у , н е гид ролизова т ь ся. Плотн ост ь орга н ических ра ст ворит елей п о возм ож н ости д олж н а отлича т ь ся от п лот н ости вод ы . • Ра ст ворит ель д олж ен бы т ь н елет у чим и д оста т очн о вы сококип ящ им (т ем п ера т у ра кип ен ия п ри а т м осф ерн ом д а влен ии д олж н а бы ть вы ш е 50оС).
22
• Орга н ические ра ст ворит ели д олж н ы бы т ь н еогн еоп а сн ы м и, н ет оксичн ы м и и д еш евы м и. Ра ст ворители, которы е обла д а ли бы всем и этим и свойства м и в п олн ой м ере, вст реча ю т ся ред ко. В хим ико-токсикологическом а н а лизе н а иболее ча сто исп оль зу ю т ся след у ю щ ие ра ст ворит ели: д иэт иловы й эф ир, хлороф орм , бен зол, н -а м ила цета т , эт ила цет а т, н -бу т иловы й, изоа м иловы й, изобу т иловы й сп ирты , н -гекса н , н -геп т а н . При исп оль зова н ии м етод а экст ра кции от су т ст ву ет хим ическое п ревра щ ен ие ра зд еляем ы х вещ ест в и н е обра зу ю т ся п обочн ы е п род у кт ы . Вещ ест ва , вы д елен н ы е с п ом ощ ь ю м ет од а экст ра кции, ка к п ра вило, н е сод ерж а т п рим есей, связа н н ы х с п роцесса м и а д сорбции и окклю зии. Э тот м ет од м ож ет исп оль зова т ь ся д ля ра зд елен ия терм ола биль н ы х вещ ест в. Прим ен ен ие м етод а экстра кции д ля кон цен т рирова н ия п озволяет п еревод ить вещ ест ва из силь н о ра зба влен н ы хра ст воров в н еболь ш ой объ ем орга н ического ра ст ворит еля. О сновны ек ол ичест венны ех арак т еристик и п роц есса эк страк ц ии Для ра счет а количест ва вещ ест ва , кот орое экст ра гиру ет ся орга н ическим и ра ст ворит елям и, н еобход им о зн а т ь кон ста н т у и коэф ф ициен т ра сп ред елен ия, ст еп ен ь экстра кции. Кон ст а н т а ра спре де ле н ия ве ще ст ва – величин а , вы ра ж а ю щ а я от н ош ен ие кон цен тра ций ра сп ред еляем ого вещ ест ва , н а ход ящ егося в вод н ой и орга н ической ф а за х(п осле н а ст у п лен ия ра вн овесия) в од н ой и той ж е ф орм е.
Р=
[ А ] орг [ А ] водн
,
гд е Р – кон ст а н т а ра сп ред елен ия; [А]орг – кон цен тра ция вещ ест ва в ф а зе орга н ического ра створит еля, м оль /л; [А]вод н – кон цен тра ция вещ ест ва вод н ой ф а зе м оль /л. Величин а кон ст а н ты ра сп ред елен ия за висит от п рирод ы ра сп ред еляем ого вещ ест ва , соста ва и свойст в п рим ен яем ого экстра ген т а , т ем п ера т у ры , п ри кот орой п ровод ит ся экст ра кция. Э та кон ст а н т а н е за висит от ра вн овесн ы х кон цен тра ций экст ра гиру ем ого вещ ест ва и объ ем ов вод н ой и н евод н ой ф а з. Коэффицие н т ра спре де ле н ия – от н ош ен ие су м м а рн ой а н а литической кон цен тра ции вещ ества в ф а зе орга н ического ра ст ворит еля к су м м а рн ой а н а литической кон цен тра ции этого вещ ест ва в вод н ой ф а зе (без у чет а т ого, в ка кой ф орм е н а ход ит ся вещ ест во в ка ж д ой ф а зе):
D=
с орг с водн
,
гд е D – коэф ф ициен т ра сп ред елен ия; сорг – су м м а рн а я а н а лит ическа я кон цен тра ция вещ ест ва в ф а зе орга н ического ра ст ворителя, м оль /л; свод н – су м м а рн а я а н а литическа я кон цен тра ция вещ ест ва в вод н ой ф а зе, м оль /л.
23
Cт е пе н ь экст ра кции – отн ош ен ие количест ва экст ра гирова н н ого вещ ест ва к общ ем у (н а ча ль н ом у ) количест ву эт ого вещ ест ва в вод н ом ра ст воре:
R=
nорг nорг + nводн
⋅ 100%,
гд е R – cт еп ен ь экст ра кции вещ ест ва , %; nорг – количест во вещ ест ва , которое экст ра гирова лось орга н ическим ра ст ворит елем ; nорг + nвод н – общ ее (н а ча ль н ое) количест во вещ ест ва в вод н ом ра ст воре. В л ияниеразл ичны х ф ак торов на п роц ессэк ст рак ц ии На экст ра кцию вещ ест в орга н ическим и ра ст ворит елям и ока зы ва ю т влиян ие ра зличн ы е ф а кт оры : п рирод а экст ра гиру ем ого вещ ест ва , п рирод а экст ра ген т а , число экст ра кций, объ ем экст ра ген т а , т ем п ера т у ра , рН сред ы , п рису т ст вие элект ролитов в вод н ы хра ст вора х, скорост ь взба лты ва н ия и д р.). Число экст ра кций и объе м экст ра ге н т а . Ч ем боль ш е число экст ра кций, т ем вы ш е ст еп ен ь извлечен ия экст ра гиру ем ого вещ ест ва . Ч ем боль ш е объ ем орга н ической ф а зы экст ра ген т а , т.е. чем вы ш е от н ош ен ие Vорг / Vвод н , т ем боль ш е ст еп ен ь извлечен ия экстра гиру ем ого вещ ест ва . Од н а ко у величен ие числа экст ра кций силь н ее влияет н а ст еп ен ь извлечен ия экст ра гиру ем ого вещ ест ва , чем у величен ие объ ем а экст ра ген т а в т о ж е число ра з, п оэтом у од н у и т у ж е ст еп ен ь извлечен ия м ож н о п олу чит ь , у м ен ь ш а я объ ем экст ра ген т а Vорг, н о у величива я число экст ра кций n. Обы чн о исп оль зу ю т д ву кра тн ы й объ ем экст ра ген т а п о сра вн ен ию с вод н ой ф а зой и п рим ен яю т 2-6 п ослед ова т ель н ы хэкстра кций. Влиян ие рН сре ды н а экст ра кцию . С п овы ш ен ием рН (т .е. с у м ен ь ш ен ием кон цен тра ции вод ород н ы х ион ов в вод н ом ра ст воре) у величива ет ся д иссоциа ция кислот ы в ра ст воре, чт о п ривод ит к у м ен ь ш ен ию ее н ед иссоциирова н н ы х м олеку л. В резу ль т а т е п он иж а ет ся экст ра гиру ем ост ь сла бой кислоты орга н ическим и ра ст ворителям и. При п овы ш ен ии кон цен тра ции вод ород н ы хион ов (т.е. с п он иж ен ием рН) в вод н ом ра ст воре у величива ет ся число н ед иссоциирова н н ы х м олеку л, а след ова т ель н о, возра ст а ет экст ра гиру ем ост ь вещ ест в кислот н ого ха ра кт ера орга н ическим и ра створителям и. При п риба влен ии кислот к орга н ическим осн ова н иям он и п ереход ят в соли. При этом у величива ет ся количест во ион ов и у м ен ь ш а ет ся количество н ед иссоциирова н н ы х м олеку л. Вслед ст вие эт ого у м ен ь ш а ет ся ст еп ен ь экст ра кции эт их вещ ест в орга н ическим и ра ст ворит елям и. От п риба влен ия щ елочей к солям орга н ических осн ова н ий у м ен ь ш а ет ся количест во ион ов и у величива ется количество н ед иссоциирова н н ы х м олеку л эт их осн ова н ий. В резу ль т а т е эт ого, в щ елочн ой сред е у величива ется ст еп ен ь экст ра кции орга н ическихосн ова н ий. На иболь ш ие количест ва а м ф от ерн ы х соед ин ен ий экст ра гиру ю т ся п ри зн а чен ии рН, соот вет ст ву ю щ ем изоэлект рической точке эт ихвещ ест в.
24
Влиян ие т е м пе ра т уры н а экст ра кцию . Изм ен ен ие т ем п ера т у ры влияет н а кон ст а н т у ра сп ред елен ия экст ра гиру ем ого вещ ест ва . Э т о объ ясн яет ся т ем , чт о п ри изм ен ен ии т ем п ера т у ры изм ен яет ся ра ст ворим ост ь экст ра гиру ем ы х вещ ест в в ка ж д ой ф а зе, а т а кж е изм ен яется вза им н а я ра ст ворим ост ь орга н ической и вод н ой ф а з. Причем с изм ен ен ием т ем п ера т у ры ра ст ворим ость вещ ест ва в ка ж д ой ф а зе изм ен яет ся н еод ин а ково. При изм ен ен ии т ем п ера т у ры м ож ет изм ен ят ь ся д иссоциа ция и а ссоциа ция вещ ества в соот ветст ву ю щ ей ф а зе. Поэтом у п ри изм ен ен ии т ем п ера т у ры изм ен яет ся гид ра т а ция (соль ва та ция) и экст ра гиру ем ост ь хим ическихсоед ин ен ий. Влиян ие эле кт ролит ов н а экст ра кцию . Пон иж ен ие ра ст ворим ости вещ ест в в вод н ы х ра ст вора х п од влиян ием элект ролит ов н а зы ва ет ся вы са лива н ием , а п овы ш ен ие ра ст ворим ост и – вса лива н ием . Вы са лива н ие являет ся ф а кт ором , п он иж а ю щ им ра ст ворим ост ь вещ ест в в вод е и п овы ш а ю щ им их экст ра гиру ем ост ь орга н ическим и ра ст ворителям и из вод н ы хра ст воров. Т вердоф азная эк ст рак ц ия Л ека рст вен н ы е и н а ркот ические сред ства , п ост у п а ю щ ие н а исслед ова н ие, кра йн е ред ко являю т ся ин д ивид у а ль н ы м и соед ин ен иям и. Неред ко объ ект а м и исслед ова н ия являю т ся п ост у п а ю щ ие из н еза кон н ого оборот а син т етические н а ркотические сред ст ва , которы е п роизвод ят ся в п од п оль н ы хла бора т ориях. В п од а вляю щ ем боль ш ин ст ве слу ча ев он и им ею т в своем сост а ве ра зличн ы е н а п олн ит ели и д оба вки (са ха р, соли ж ирн ы хкислот, кра хм а л, сод а , т а ль к и д р.), либо сод ерж а т за грязн ен ия или п ром еж у т очн ы е и п обочн ы е п род у кт ы син т еза , сод ерж а н ие ж е н а ркот ически а кт ивн ого ком п он ен та в т а кихп реп а ра т а хочен ь н изкое. При эт ом ра зд елен ие, вы д елен ие, кон цен трирова н ие и очист ка целевы х ком п он ен т ов тра д ицион н ы м и м ет од а м и (н а п рим ер, ж ид кост н ой экст ра кцией) н еэф ф ект ивн ы , а ин огд а п рост о н евозм ож н ы . Реш ен ие та кого род а п роблем возм ож н о п ри п рим ен ен ии н а ст а д ии п робоп од гот овки м ет од а т верд оф а зн ой экст ра кции, п озволяю щ его осу щ ест влят ь од н оврем ен н ое ра зд елен ие, вы д елен ие и кон цен трирова н ие целевы х ком п он ен тов из биологических ж ид костей и ихэкст ра кт ов, лека рст вен н ы хи н а тивн ы хн а ркот ическихсред ств. Т а кой п од ход д а ет возм ож н ост ь п олу чен ия вещ ест в в чист ом вид е, что в д а ль н ейш ем п озволяет п ровод ит ь ид ен тиф ика цию м ет од а м и ИК -, У Ф– сп ект роскоп ии, Т СХ , Г Ж , ВЭ Ж Х , м етод ом хром а т о-м а сс-сп ект ром ет рии. В осн ове м етод а тверд оф а зн ой экст ра кции леж ит п рин цип колон очн ой хром а тогра ф ии, кот оры й осн ова н н а сп ециф ическом вза им од ейст вии вы д еляем ого из биом а т ериа ла ком п он ен т а с сорбен том , н а ход ящ им ся в н еболь ш ом п а трон е. Па трон –ка рт рид ж им еет п олиэтилен ову ю оболочку , вн у т ри кот орой н а ход ит ся сорбен т, у п а кова н н ы й м еж д у д ву м я п ористы м и ф иль т ра м и. Па трон ы м огу т соед ин ят ь ся д ру г с д ру гом , п ред ст а вляя более
25
ш ирокие возм ож н ост и д ля их исп оль зова н ия. Ч а щ е всего д ля за п олн ен ия п а т рон ов п рим ен яю т сорбен ты н а осн ове силика геля и хим ически м од иф ицирова н н ого силика геля. Для м од иф ика ции силика геля исп оль зу ю т ся вещ ест ва , сод ерж а щ ие ра зличн ы е ф у н кцион а ль н ы е гру п п ы (н итриль н ы е, д иоль н ы е, а м ин о-, ка рбокси- и су ль ф огру п п ы ), а т а кж е а лиф а тические (С 1 –С 18) и а ром а тические (ф ен иль н ы е) гру п п ы . Вы бор соот вет ст ву ю щ его т ип а п а трон а связа н со свойст ва м и оп ред еляем ого вещ ест ва и осу щ ест вляет ся п о т ип у п од обия. Ч а ст о в п ра кт ике Х Т А исп оль зу ю т ся от ечест вен н ы е п а т рон ы ф ирм ы “Диа п а к”, за п олн ен н ы е н ем од иф ицирова н н ы м силика гелем (Диа п а к Силика гель ) и силика гелем , м од иф ицирова н н ы м гекса д ециль н ы м и гру п п а м и С 16 (Диа п а к С 16). При исп оль зова н ии п а т рон ов Диа п а к д ля боль ш ин ст ва вещ ест в п ровод ят след у ю щ ие оп ера ции. 1. Акт ива ция – п ривед ен ие п а трон а в ра бочее состоян ие п у т ем п ром ы вки эт иловы м или м етиловы м сп иртом (2-10 м л). Скорост ь п роп у ска н ия 2,5 м л/м ин . 2. К он д ицион ирова н ие – п роп у ска н ие бу ф ерн ого ра ст вора (а цета т н ого или а м м иа чн ого) в за висим ости от исслед у ем ы х вещ ест в. Объ ем бу ф ерн ого ра ст вора – 10 м л. Скорост ь п роп у ска н ия 2,5 м л/м ин . 3. Сорбция – п роп у ска н ие исслед у ем ого ра ст вора через п а т рон . Объ ем п робы обы чн о 100 м л. Скорост ь п роп у ска н ия 2,5 м л/м ин . 4. Десорбция – у д а лен ие исслед у ем ого вещ ест ва с сорбен т а с п ом ощ ь ю возд у ха ш п рицем или ва ку у м н ы м н а сосом . 5. Э лю ирова н ие обра зца осу щ ест вляется реа ген том , кот оры й п рим ен ялся н а ст а д ии а ктива ции. Объ ем элю ен т а – 50-100 м л. Вы сока я эф ф ект ивн ост ь вы п у ска ем ы хп а трон ов п озволяет исп оль зова т ь их д ля п робоп од гот овки ш ирокого кру га объ ект ов – от лека рст вен н ы х п реп а ра тов слож н ого сост а ва д о “у личн ы х н а ркот иков” и биологических ж ид костей (м оча , кровь , сы ворот ка и т .д .), а та кж е экст ра кт ов биологических ж ид костей. Ж идк ост ь-жидк ост ная эк страк ц ия Ж ид кост ь – ж ид кост н а я экстра кция ка к м ет од изолирова н ия являет ся н а сегод н яш н ий д ен ь са м ы м ра сп ростра н ен н ы м сп особом вы д елен ия н а ркотическихвещ еств из биообъ ект ов. Э кст ра кция ве ще ст в кислого и осн овн ого ха ра кт е ра . 50 м л м очи в д елит ель н ой ворон ке н а 200 м л п од кисляю т 2 М солян ой кислот ой д о рН 1-2 п о у н иверса ль н ом у ин д ика т ору . Доба вляю т 50 м л д иэтилового эф ира и п ровод ят экст ра кцию в т ечен ие 3-5 м ин у т (п ерем еш ива я ф а зы , без эн ергичн ого вст ряхива н ия). После ра зд елен ия ф а з н иж н ю ю вод н у ю ф а зу слива ю т в д ру гу ю д елит ель н у ю ворон ку , сод ерж а щ у ю 50 м л д иэтилового эф ира , а орга н ическу ю ф а зу ф иль т ру ю т через безвод н ы й су ль ф а т н а трия в су хой ст а ка н . Повторн у ю
26
экст ра кцию из вод н ой ф а зы п ровод ят а н а логичн о. Э ф ирн ое извлечен ие ф иль т ру ю т через безвод н ы й Na2SO4 и обе эф ирн ы е вы т яж ки объ ед ин яю т (экст ра кт I). Вод н у ю ф а зу сохра н яю т, п ерен осят в д елит ель н у ю ворон ку , д овод ят рН д о 9-10 NaOH. За тем п ровод ят экстра кцию 50 м л хлороф орм а в т ечен ие 3-5 м ин у т . За т ем н иж н ю ю орга н ическу ю ф а зу слива ю т, ф иль т ру я через безвод н ы й су ль ф а т н а т рия в су хой ста ка н . Вод н у ю ф а зу п овт орн о экст ра гиру ю т 50 м л хлороф орм а . Орга н ические ф а зы объ ед ин яю т (экстра кт 2). Вод н у ю ф а зу от бра сы ва ю т. Орга н ические ра ст ворит ели из экст ра кт ов 1 и 2 у д а ляю т в исп а рит ель н ы х ча ш ка хв т оке т еп лого возд у ха . С у хие ост а т ки экст ра кт ов 1 и 2 ра ст воряю т в 1-2 м л хлороф орм а или д иэт илового эф ира и п ерен осят в м а ркирова н н ы е п робирки с п ритерты м и п робка м и. Э кстра кт 1 сод ерж ит вещ ест ва кислого, н ейтра ль н ого и сла боосн овн ого ха ра кт ера ), экст ра кт 2 – вещ ест ва осн овн ого ха ра кт ера . Да лее п ровод ят а н а лиз экст ра кт ов. Некот оры е вещ ест ва м ет а болически связа н ы с белком или кон ъ ю гирова н ы (т .е. биохим ически п еревед ен ы в вод ора ст ворим ы е п роизвод н ы е, н а п рим ер, с глю ку рон овой кислотой). Поэт ом у биож ид кост ь п еред экстра кцией н еобход им о гид ролизова т ь д ля т ого, чт обы ра зру ш ит ь кон ъ ю га н т п еред изолирова н ием . Т О Н К О СЛО Й Н А Я ХРО М А Т О ГРА Ф И Я В А Н А ЛИ ЗЕ В Е Щ Е СТ В , В ЫЗЫВ А Ю Щ И Х О Д У РМ А Н И В А Н И Е П ринц ип м ет ода М ет од тон кослойн ой хром а тогра ф ии (Т С Х ) являет ся од н им из осн овн ы х м ет од ов исслед ова н ия вещ ест в од у рм а н ива ю щ его д ейст вия. М етод т он кослойн ой хром а т огра ф ии п рим ен яется п ри п ровед ен ии скрин ин говы х исслед ова н ий обра зца н еизвест н ой п рирод ы и п од т верж д а ю щ их (ча ст н ы х) исслед ова н ий н а кон кретн ое сред ст во или вещ ест во, п од т верж д а ю щ их или от рица ю щ ихего п рису т ст вие в исслед у ем ом обра зце. М ет од Т СХ от н осится к п лоскост н ы м вид а м хром а тогра ф ии. Х ром а тогра ф ическое ра зд елен ие обу словлен о п ерен осом ком п он ен тов п од виж н ой ф а зы вд оль слоя н еп од виж н ой ф а зы с ра зличн ы м и скоростям и в соот вет ст вии с коэф ф ициен т а м и ра сп ред елен ия ра зд еляем ы х ком п он ен т ов м еж д у д ву м я ф а за м и. Cорбе н т ы . В тон кослойн ой хром а т огра ф ии обы чн о исп оль зу ю т за креп лен н ы е слои сорбен т а н а м ет а ллической, ст еклян н ой или п ла стиковой п од лож ке. В ка честве сорбен т а п рим ен яю т ся силика гели ра зличн ого зерн ен ия, обра бота н н ы е или н еобра бот а н н ы е реа кт ива м и д ля осу щ ест влен ия ка к п рям ого, т а к и обра щ ен н оф а зн ого ва риа н т ов хром а т огра ф ии, а т а кж е
27
целлю лозу , окись а лю м ин ия, кизель гель , сеф а д екс, п олиа м ид и н екоторы е д ру гие м а т ериа лы . Ин огд а к сорбен т а м д оба вляю т ф лу оресцен тн ы й ин д ика тор. Для за креп лен ия а д сорбцион н ого слоя п рим ен яю т ся гип с, кра хм а л, а га р-а га ри д ру гие связу ю щ ие м а т ериа лы . В а н а лизе ча сто исп оль зу ю т гот овы е п ла стин ки “Силу ф ол” и “С орбф ил”. В ка чест ве п од лож ки зд есь исп оль зу ет ся а лю м ин иева я ф оль га или п олим ерн ы е м а т ериа лы , сорбен т – силика гель . Обы чн о в п ра кт ике Х Т А исп оль зу ю т п ла стин ы ра зм ером 5х5, 10х10 или 20х20 см . Х ром а т огра ф ирова н ие вещ ест в п ровод ят в герм ет ически за кры т ы х ка м ера х. При этом н а иболее ча сто из всехвозм ож н ы хва риа н тов исп оль зу ет ся восход ящ ее и горизон т а ль н ое элю ирова н ие хром а тогра ф ической систем ы ра ст ворит елей. В целом ряд е слу ча ев хорош ие резу ль т а т ы д а ет м н огом ерн а я и кру гова я хром а тогра ф ия. М е т одика ТС Х за клю ча ется в след у ю щ ем : н а лин ию ст а рт а осторож н о н а н осят а н а лизиру ем ы е ра ст воры , чт обы н е п овред ить п оверхн ост ь слоя сорбен т а . Ра ст воры н а п ла стин ку н а н осят с исп оль зова н ием м ерн ы хка п илляров или м икрош п рицов в н есколь ко п рием ов, обра щ а я вн им а н ие н а ра зм еры п ят н а (д иа м етр п ят н а н е д олж ен п ревы ш а ть 3 м м ). Од н оврем ен н о н а п ла стин ку н а н осят эт а лон н ы е ра створы исслед у ем ы х вещ ест в или ра ст воры м ет чиков. Ра сст оян ие м еж д у п ят н а м и обра зцов н а лин ии ста рт а н е д олж н о бы т ь м ен ь ш е 1 см . При ра боте с хром а тогра ф ической п ла стин кой н ель зя ка са т ь ся п а ль ца м и слоя сорбен т а , п ла ст ин ку беру т т оль ко за кра я. Сист ем ы ра ст ворит елей см еш ива ю т в т ребу ем ы х соотн ош ен иях н еп осред ст вен н о п еред исп оль зова н ием п ри п ом ощ и ин т ен сивн ого п ерем еш ива н ия. К а м еры герм етичн о за кры ва ю т кры ш кой и оста вляю т н а 0,5-1 ча с д ля у ст а н овлен ия ра вн овесия. Для ка ж д ой н овой п ла стин ки гот овят н ову ю п орцию систем ы . Доп у ска ет ся врем ен н ое хра н ен ие готовой сист ем ы в п осу д е с п рит ерт ой п робкой. К оличество ра ст ворит еля д ля п ровед ен ия эксп ерим ен т а ра ссчиты ва ет ся т а ким обра зом , чтобы п ри восход ящ ем ва риа н т е п ровед ен ия хром а тогра ф ии у ровен ь его соот ветст вова л п огру ж ен ию п ла стин ы н е более чем н а 5 м м . Ра сход сист ем ы н а ста н д а рт н у ю ка м еру д ля п ла ст ин ра зм ером 10х10 см с п лоским д н ом сост а вляет 4-4,2 м л. К ра й п ла ст ин ки п огру ж а ю т н иж е ст а ртовой лин ии в сист ем у ра ст ворит елей. По м ере п род виж ен ия ж ид кост и п о п ла стин ке п од д ейст вием ка п иллярн ы х сил п роисход ит ра зд елен ие см еси вещ еств, от д елен ие их от п рису т ст ву ю щ их п рим есей. Да лее вы н им а ю т п ла стин ку , от м еча ю т гра н ицу п од ъ ем а ж ид кост и, су ш а т и п роявляю т оп ред елен н ы м реа ген том . От м еча ю т п олож ен ие п ят ен , от веча ю щ ихисслед у ем ы м вещ ества м и н а ход ящ иеся м еж д у лин иям и ст а рта и ф рон т а ра ст ворителя. К ачественны й и к ол ичественны й анал из м етодом т онк осл ойной х ром ат ограф ии
28
Ка ч е ст ве н н ы й а н а лиз . На иболее ча ст о п ри ид ен тиф ика ции н а ркотических и од у рм а н ива ю щ их сред ст в п роявлен ие хром а тогра ф ических зон осу щ ест вляет ся п о свечен ию в У Ф-свете или га ш ен ию ф лу оресцен ции ин д ика тора , д оба влен н ого к сорбен т у . После п росм отра п ла ст ин ок в У Ф-свет е, их обра ба ты ва ю т реа кт ивом или п ослед ова т ель н о н есколь ким и реа кт ива м и в соот вет ст вии с м етод икой. После обра бот ки реа кт ива м и отм еча ю т п олож ен ие и окра ску хром а тогра ф ическихзон . Осн овн ой ка чест вен н ой ха ра кт еристикой вещ ест ва в т он кослойн ой хром а тогра ф ии являет ся з н а ч е н ие Rf (от н осит е льн а я скорост ь пе ре м е ще н ия ком пон е н т а в т он ком слое ) , ра счет которого п ровод ят п о ф орм у ле:
Rf =
Lx , Ls
гд е Lx – д лин а п робега цен тра хром а тогра ф ической зон ы исслед у ем ого соед ин ен ия; Ls – д лин а п робега ф рон та ра ст ворит еля. В соот вет ствии с оп ред елен ием Rf всегд а ≤1. Величин а Rf за висит от п рирод ы н осит еля, т олщ ин ы слоя, ка чест ва и п рирод ы ра ст ворит елей, их соот н ош ен ия, сп особа н а н есен ия п робы , д ет ект ирова н ия, т.е. от техн ики эксп ерим ен та , т ем п ера т у ры и ряд а д ру гихф а кт оров. Для сн иж ен ия влиян ия н а п олу ча ем ы е резу ль т а т ы ф а кт оров, обу словлен н ы х у словиям и п ровед ен ия эксп ерим ен т а , ча ст о исп оль зу ю т от н осит е льн ую ве лич ин у RRf,, котора я п ред ста вляет собой от н ош ен ие зн а чен ия Rf исслед у ем ого вещ ест ва к зн а чен ию Rf ‘ ст а н д а рт а -м ет чика .
RRf =
Rf Rf
'
Бесцветн ы е вещ ест ва м ож н о п еревести в окра ш ен н ы е п у т ем обра бот ки их сп ециа ль н ы м и реа ген т а м и. Для эт ого п ла ст ин ку оп ры скива ю т из п у ль вериза т ора или н а н осят реа ген т ка п ель н о в зон у вещ ест ва или м ет чика . Для ка ж д ого сп ециф ического реа ген т а ж ела т ель н о им ет ь ин д ивид у а ль н ы й п у ль вериза т ор. Пу ль вериза тор, у ж е исп оль зова вш ийся, н еобход им о т щ а т ель н о п ром ы т ь ! Некоторы е возн ика ю щ ие окра ски м огу т бы стро исчеза т ь . За клю чен ие о п рису т ст вии или от су тст вии исслед у ем ого вещ ест ва д а ется н а осн ова н ии зн а чен ий Rf, п ри сра вн ен ии ха ра кт еристик п оглощ ен ия или исп у ска н ия У Ф-свет а п ри ра зличн ы х д лин а х волн , а та кж е п у т ем сра вн ен ия окра ски хром а тогра ф ических зон исслед у ем ого вещ ест ва и исп оль зова н н ого ст а н д а рт а п осле обра бот ки ихсп ециф ическим реа ген том . В н а стоящ ее врем я су щ ест ву ю т ком п лексы д ля ид ен тиф ика ции ра зличн ы хкла ссов вещ ест в н а осн ове м ет од а Т С Х , осн ову кот оры хсост а вляю т д а н н ы е о хром а т огра ф ическом п овед ен ии боль ш ого количества , д о н есколь ких сот ен или ты сяч вещ ест в. Колич е ст ве н н ы й а н а лиз . При а н а лизе п ят ен п ред п ола га ю т су щ ест вова н ие оп ред елен н ой связи м еж д у п лощ а д ь ю п ятн а и сод ерж а н ием исслед у ем ого вещ ест ва (н а п рим ер, н а личие п роп орцион а ль н ой или лин ейн ой за висим ости), кот ору ю у ст а н а влива ю т м ет од ом п остроен ия гра д у ировочн ого гра ф ика ,
29
изм еряя п лощ а д и п ят ен “свид ет елей”. Ин огд а сра вн ива ю т ин т ен сивн ост ь окра ски п ят ен , п ола га я, что ин т ен сивн ост ь окра ски п ятн а п роп орцион а ль н а количест ву окра ш ен н ого ком п он ен т а . Ра зд елен н ы е зон ы м ож н о сн ят ь с п ла стин вм есте со слоем , д есорбирова т ь ком п он ен т в ра створит ель и д а лее п роа н а лизирова т ь ра ст вор ф изикохим ическим и м етод а м и, что п озволяет д оп олн ят ь у ж е им ею щ у ю ся ин ф орм а цию об исслед у ем ы х вещ ест ва х д ру гим и м ет од а м и а н а лиза и п ровод ит ь ихколичест вен н ое оп ред елен ие. С п ом ощ ь ю Т СХ м ож н о оп ред елят ь вещ ест ва в количества хот 10-9 д о 10-6 г, ош ибка оп ред елен ия ком п он ен тов – 5-10%. В оспроиз водим ост ь ре з ульт а т ов иссле дова н ия м е т одом ТС Х д остига ет ся п ровед ен ием ихп ри след у ю щ иху словиях: 1. Ин стру м ен т а ль н ы е у словия п ровед ен ия эксп ерим ен т а , кот оры е вклю ча ю т кон ст ру кцию исп оль зу ем ой хром а тогра ф ической ка м еры ; сп особ ее герм етиза ции; у словия н а сы щ ен ия ка м еры п а ра м и ра ст ворит еля и т.д . 2. Свойст ва хром а т огра ф ической сист ем ы , кот оры е вклю ча ю т т ип и сп особ хим ической обра бот ки исп оль зова н н ого сорбен т а ; величин у его зерн ен ия; т олщ ин у слоя, а т а кж е тип п од лож ки, н а кот ору ю он н а н есен ; вид и количест во вн есен н ы х в а д сорбен т всп ом ога т ель н ы х вещ ест в, т а ких ка к связу ю щ ие ком п он ен т ы и ф лу оресциру ю щ ие вещ ест ва ; м ет од а кт ива ции сорбен т а , н а п рим ер, вы д ерж ива н ие п ри п овы ш ен н ой т ем п ера т у ре; сп особ обра бот ки п ла ст ин ки им п регн иру ю щ им и бу ф ера м и, щ елоча м и или кислота м и, а т а кж е вещ ества м и, м од иф ициру ю щ им и ее свойст ва . 3. М етод ические п од ход ы к н а н есен ию п робы и п ровед ен ию хром а тогра ф ирова н ия, которы е п ред у см а т рива ю т сп особ н а н есен ия обра зца н а п ла ст ин ку и исп оль зова н н ое п ри этом у ст ройст во; ра зм еры н а ча ль н ой зон ы хром а тогра ф ирова н ия; п олярн ост ь ра ст ворит еля, исп оль зова н н ого д ля н а н есен ия обра зца и его количест во; п род олж итель н ост ь исслед ова н ия и величин у п робега ра ст ворит еля; его сост а в и чистот у ; т ем п ера т у ру и вла ж н ость окру ж а ю щ ей сред ы в м ом ен т п ровед ен ия исслед ова н ия. П ре дст а вле н ие ре з ульт а т ов иссле дова н ий. В эксп ертн ом за клю чен ии п олу чен н ы е ра ссм а т рива ем ы м м етод ом резу ль т а т ы д олж н ы сод ерж а ть п од робн ое оп иса н ие у словий п ровед ен ия эксп ерим ен та : хром а тогра ф ические п ла ст ин ы (а д сорбен т , н а личие или от су т ст вие ин д ика т ора в его сост а ве, исп оль зова н н ое связу ю щ ее вещ ест во, т ип п од лож ки д ля а д сорбен т а , ф ирм а – изготовитель , а т а кж е п ровед ен ие сп ециа ль н ой обра бот ки п ла стин п еред исслед ова н ием , н а п рим ер, вы су ш ива н ие п ри п овы ш ен н ой т ем п ера т у ре или им п регн ирова н ие щ елочь ю или бу ф ером ). Во м н огих слу ча ях ф ирм ы – изготовители ш иф ру ю т н екот ору ю ин ф орм а цию о своей п род у кции п од ф ирм ен н ы м и н а зва н иям и, н а п рим ер, SILUFOL и СОРБФИЛ или СОРБИТ ОН. В эт ом слу ча е д ост а т очн о п ривести д а н н ое н а зва н ие п олн ост ь ю . Да лее ид ет оп иса н ие исп оль зова н н ы хсист ем ра ст ворителей с у ка за н ием ихка чествен н ого и количест вен н ого соста ва , сп особа хром а тогра ф ирова н ия (вертика ль н ы й – обы чн о оп у ска ет ся, горизон та ль н ы й, кру говой или м н огом ерн ы й), а т а кж е особы х п рием ов, н а п рим ер, п ровод илось ли хром а т огра ф ирова н ие без
30
н а сы щ ен ия ка м еры или п ри п овы ш ен н ой тем п ера т у ре. Схем а обра бот ки хром а тогра ф ических п ла стин д олж н а сод ерж а т ь оп иса н ие исп оль зова н н ы х реа кт ивов с их п олн ы м ка чест вен н ы м и количест вен н ы м соста вом , п ослед ова т ель н ости п ровед ен ия эт а п ов обра бот ки, их ин т ен сивн ост и и п род олж ит ель н ости. Особо от м еча ет ся ин тен сивн ост ь и окра ска хром а тогра ф ических зон исслед у ем ы х вещ ест в п осле обра бот ки ка ж д ы м реа кт ивом , а т а кж е величин а их Rf или RRf. При п ровед ен ии п од т верж д а ю щ их исслед ова н ий н а кон кретн ое вещ ест во д оп у ска ет ся у ка за н ие о том , что в д а н н ы хкон кретн ы ху словияхвеличин а Rf и окра ска хром а т огра ф ической зон ы исслед у ем ого вещ ест ва исп оль зова н н ы м и реа кт ива м и совп а д а ет с величин ой Rf и окра ской ст а н д а рт н ого ра ст вора -м етчика . В за клю чен ии п ривод ят ся т а кж е д а н н ы е о п ред еле обн а ру ж ен ия м етод а . Н Е Н А П РА В ЛЕ Н Н ЫЙ А Н А ЛИ З Н А РК О Т И ЧЕ СК И Х И О Д У РМ А Н И В А Ю Щ И Х В Е Щ Е СТ В А нал из неизвестны х образц ов Ан а лиз н е из ве ст н ы х т а бле т ок. Е сли н а а н а лиз д ост а влен ы н еизвестн ы е т а блет ки, от м еча ю т их цвет, ф орм у , ра зм ер, м а ркировку н а п оверхн ости и сра вн ива ю т с коллекцион н ы м и обра зца м и. За т ем т а блет ку , п ри н еобход им ости п од стру ей вод ы , отм ы ва ю т от оболочки, изм ель ча ю т и см еш ива ю т с эта н олом (м ет а н олом ). При эт ом в оса д ке ока ж у т ся вход ящ ие в сост а в т а блет ки, н ера ст ворим ы е в сп ирт е н а п олн ители. Ниж е п ред ст а влен кра т кий п еречен ь н екот оры х всп ом ога т ель н ы х вещ ест в, д оба вляем ы х п ри изгот овлен ии лека рст вен н ы хф орм . Л ека рст вен н а я ф орм а Аэрозоли Ин га лят оры Ин ъ екцион н ы е ра створы Свечи Т а блет ки
Всп ом ога т ель н ы е вещ ест ва Фт ороу глевод ород ы (три- и д ихлорф лю ором ета н ) Ин ертн ы е га зы Проп илен гликоль , эт илолеа т, бен зилбен зоа т, ф ен ол, крезол, хлорбу т а н ол, бен зиловы й сп ирт, цит ра т ы , а цет а т ы , ф осф а ты и д р. Проп илен гликоль , п олиэт илен гликоль Г ип с, ф осф а ты , т а ль к, ж ела т ин , а га р, коллоид н ы е са лицила ты , м а н н итол и д р.
Полу чен н у ю сп ирт ову ю вы т яж ку ф иль т ру ю т и исп оль зу ю т д ля п ровед ен ия п ред ва рит ель н ы хп роб, цветн ы хтестов, Т СХ . Е сли д ост а влен н ы й п реп а ра т м а ркирова н , н о в ла бора тории отсу т ст ву ет м ет од ика д ля его исслед ова н ия, н еобход им о у зн а т ь хим ическое н а зва н ие или ф орм у лу п реп а ра т а , оп ред елит ь , к ка ком у кла ссу соед ин ен ий он отн осит ся, ка кие ф у н кцион а ль н ы е гру п п ы , оп ред еляю щ ие п рин а д леж н ост ь п реп а ра т а к
31
д а н н ом у кла ссу соед ин ен ий, м огу т бы ть исп оль зова н ы д ля его обн а ру ж ен ия в биосред а х, п ри ка ком зн а чен ии рН он бу д ет экст ра гирова т ь ся орга н ическим ра ст ворит елем из биосред . После отра бот ки м етод а оп ред елен ия его н а д оста влен н ом п реп а ра т е этот м ет од м ож н о исп оль зова т ь п ри ра бот е с биом а т ериа лом . Ан а лиз объе кт ов ра ст ит е льн ого происхожде н ия . При осм отре объ ект а ра стит ель н ого п роисхож д ен ия обра щ а ю т вн им а н ие н а его вн еш н ий вид : от м еча ю т ст еп ен ь изм ель чен н ости, н а личие сем ян (м а к), цвет и за п а х. М а кова я солом ка им еет цвет от серо-зелен ого д о серого, га ш иш – от серо-зелен ого д о коричн евого и им еет а ром а тический за п а х. Из д ост а влен н ого н а а н а лиз ра стит ель н ого объ ект а гот овят сп ирт овое извлечен ие, д ля п риготовлен ия кот орого беру т 1 г ра стит ель н ого сы рь я и 10 м л см еси эт а н ола с хлороф орм ом (1:2), н а грева ю т н а вод ян ой ба н е д о н а ча ла кип ен ия. Полу чен н ое извлечен ие ф иль т ру ю т исслед у ю т м етод а м и Т СХ , п ровод ят цветн ы е тест ы . Ан а лиз порош ка орга н ич е ской природы . (С м . “Ан а лиз н еизвест н ы х т а блеток”). Ан а лиз жидкост и н е из ве ст н ого сост а ва . Доста влен н у ю н а исслед ова н ие ж ид кост ь сн а ча ла п од верга ю т орга н олеп тическом у а н а лизу . 1. От м еча ю т цвет, за п а х. 2. У ст а н а влива ю т величин у рН п о у н иверса ль н ом у ин д ика т ору (кислот а , щ елочь ). 3. Проверяю т см еш ива ем ост ь с вод ой. 4. Изм еряю т п ока за т ель п релом лен ия ж ид кости н а реф ра кт ом етре. 5. Провод ят п ред ва рит ель н ы е п робы . Т СХ-ск рининг вещ еств к исл отного и основного х арак т ера Х ром а тогра ф ический скрин ин г п реслед у ет цель отобра т ь , от сеят ь ча ст ь вещ ест в, чт обы су зит ь кру г исслед ова н ия и сокра т ит ь врем я а н а лиза . ТС Х-скрин ин г в а н а лиз е ве ще ст в кислот н ого и сла боосн овн ого ха ра кт е ра , экст ра гируе м ы ххлороформ ом из кислого ра ст вора (рН 2-2,5) Из лека рст вен н ы хвещ ест в, им ею щ их оп ред елен н ое т оксикологическое зн а чен ие, в извлечен иях из кислого ра ст вора м огу т бы т ь : п роизвод н ы е ба рбит у ровой кислот ы , п ира золон а , 1,4-бен зод иа зеп ин а , коф еин . Пла ст ин ку п ом ещ а ю т в общ у ю сист ем у ра ст ворит елей: хлороф орм – д иокса н – а цет он – 25%-н ы й ра ст вора м м иа ка (45:47,5:5:2,5). К огд а ра ст воритель п од н им ет ся н а вы сот у 10 см , п ла стин ку вы н им а ю т, вы су ш ива ю т и обра ба т ы ва ю т реа ген та м и в след у ю щ ей п ослед ова т ель н ости: • 5%-н ы й ра ст ворсу ль ф а т а рт у т и(II) в кон ц. серн ой кислоте и 0,1%-н ы й ра ст вор д иф ен илка рба зон а (ДФК ) в хлороф орм е. При эт ом н а п ла стин ке обн а ру ж ива ю т ся п роизвод н ы е ба рбит у ровой кислоты в вид е ф иолетовы хп ят ен .
32
• 10%-н ы й ра ст ворхлорид а ж елеза (III). Обн а ру ж ива ю т ся п роизвод н ы е п ира золон а . • м од иф ицирова н н ы й реа кт ив Дра ген д орф а . Обн а ру ж ива ю т ся соед ин ен ия, сод ерж а щ ие в ст ру кт у ре вт оричн ы й и трет ичн ы й а том а зота (п роизвод н ы е 1,4-бен зод иа зеп ин а , п ира золон а , коф еин ). • 10%-н ы й ра створ серн ой кислоты . Для п овы ш ен ия чу вст вит ель н ости реа кт ива Дра ген д орф а . Е сли н и в од н ой из зон н е п роявилось н и од н ого п ятн а , т о д ела ю т за клю чен ие о н ен а хож д ен ии вещ ест в в извлечен ии из кислого ра ст вора . ТС Х-скрин ин г в а н а лиз е ве ще ст в осн овн ого ха ра кт е ра , экст ра гируе м ы х хлороформ ом из ще лоч н ого ра ст вора (рН 8-10) Из лека рст вен н ы хвещ ест в, им ею щ их оп ред елен н ое т оксикологическое зн а чен ие, в извлечен иях из щ елочн ого ра ст вора м огу т бы ть а лка лоид ы и син тет ические вещ ест ва осн овн ого ха ра кт ера . Пла стин ку п ом ещ а ю т в сист ем у ра ст ворит елей: хлороф орм – д иокса н – а цетон – 25%-н ы й ра ст вор а м м иа ка (45:47,5:5:2,5). К огд а ра ст ворит ель п од н им ет ся н а вы соту 10 см , п ла стин ку вы н им а ю т, вы су ш ива ю т и обра ба т ы ва ю т реа ген та м и в след у ю щ ей п ослед ова т ель н ости: • 10%-н ы й ра ст вор хлорид а ж елеза (III). При эт ом обн а ру ж ива ю т ся п роизвод н ы е п ира золон а и ф ен отиа зин а . • 16%-н ы й ра ст вор серн ой кислоты в эт а н оле. Обн а ру ж ива ю т ся п роизвод н ы е ф ен отиа зин а . • 10%-н а я серн а я кислот а и У Ф-свет. Обн а ру ж ива ется хин ин . • м од иф ицирова н н ы й реа кт ив Дра ген д орф а . Обн а ру ж ива ю т ся соед ин ен ия, сод ерж а щ ие в стру кт у ре т рет ичн ы й а зот. • 10%-н а я серн а я кислот а . Для п овы ш ен ия чу вст вит ель н ост и и у силен ия окра ски п ят ен с реа кт ивом Дра ген д орф а . Е сли н и в од н ой из зон н е п роявилось н и од н ого п ятн а , т о д ела ю т за клю чен ие о н ен а хож д ен ии вещ ест в в извлечен ии из щ елочн ого ра ст вора . ХИ М И К О -Т О К СИ К О ЛО ГИ ЧЕ СК И Й А Н А ЛИ З О Т Д Е ЛЬ Н ЫХ ГРУ П П Н А РК О Т И ЧЕ СК И Х И О Д У РМ А Н И В А Ю Щ И Х В Е Щ Е СТ В (Н А П РА В ЛЕ Н Н ЫЙ А Н А ЛИ З) П роизводны ебарбитуровой к исл оты И з олирова н ие . 10 м л м очи в д елит ель н ой ворон ке п од кисляю т 2 М ра ст вором солян ой кислот ой д о рН 2, т риж д ы экст ра гиру ю т хлороф орм ом п о 10 м л. Х лороф орм н ы е ф а зы отд еляю т и объ ед ин яю т, ф иль тру я через безвод н ы й су ль ф а т н а т рия. Орга н ический ра ст ворит ель у д а ляю т в т оке т еп лого возд у ха . Хром а т огра фич е ска я оч ист ка и обн а руже н ие Ост а ток ра ст воряю т в н еболь ш ом объ ем е (0,1-0,2 м л) хлороф орм а и количест вен н о с п ом ощ ь ю ка п илляра п ерен осят н а ст а рт ову ю лин ию хром а тогра ф ической п ла стин ки
33
“Cилу ф ол”. На ра сст оян ии 2 см от а н а лизиру ем ой п робы в од н у т очку (д иа м етр н е более 0,5 м л) п ослед ова тель н о вн осят п о 0,02 м л сп иртовы хра ст воров (1 м г/ м л) ба рбит а ла , ф ен оба рбита ла и эт а м ин а ла н а т рия. Пят н а п од су ш ива ю т , хром а тогра ф ирова н ие п ровод ят в систем е хлороф орм – н -бу т а н ол – 25%-н ы й ра ст вор а м м иа ка (70 : 40 : 5). К а м ера п ред ва ритель н о н а сы щ а ется систем ой ра ст ворителей в т ечен ие 20 м ин у т . Длин а п робега ра ст ворит елей 10 см . После п од су ш ива н ия п ри ком н а т н ой т ем п ера т у ре или в т оке т еп лого возд у ха д о п олн ого у д а лен ия ра ст ворит елей, п ла ст ин ки оп ры скива ю т соот ветст ву ю щ им и реа ген та м и. Р е а ге н т ы , использ уе м ы е для проя вле н ия пла ст ин ки. 1. Ра ст ворсу ль ф а т а рту т и(II), НgSO4, 5%-н ы й ра ст вор. 2. Ра ст вор д иф ен илка рба зон а (ДФК ), 0,02%-н ы й ра ст вор (след у ет избега ть избы т ка д иф ен илка рба зон а ). Ба рбит у ра т ы обн а ру ж ива ю т в вид е син е-ф иолет овы хили кра сн ы хп ят ен н а исчеза ю щ ем сирен евом ф он е. Пред ел обн а ру ж ен ия: 1 м кг а н а лизиру ем ого соед ин ен ия. Зн а ч е н ия Rf: Ба рбит а л 0,70-0,75. Фен оба рбит а л 0,49-0,55. Э т а м ин а л н а трия 0,94-0,96. Ба рба м ил 0,85-0,92. Бу т оба рбит а л 0,78-0,85. Величин ы Rf п о от н ош ен ию к м ет чика м д а ю т возм ож н ост ь сд ела т ь п ред п олож ен ие о п рису т ст вии ба рбит у ра т ов в исслед у ем ой п робе. При п олож ит ель н ом резу ль т а т е хром а тогра ф ического исслед ова н ия п ровод ит ся д оп олн ит ель н ое обн а ру ж ен ие с п ом ощ ь ю цвет н ы х тест ов или м икрокрист а ллоскоп ическихреа кций. Да н н ы е реа кции п ровод ят ся с ост а т ка м и п осле у д а лен ия орга н ического экст ра ген т а и п ровед ен ия изолирова н ия из н овой а ликвот ы м очи (10 м л) п о м етод ике, оп иса н н ой вы ш е. Ц ве т н ой т е ст : н а ф иль трова ль н у ю бу м а гу в од н у т очку н а н осят 2-3 ка п ли ра створа ба рбит у ра та в орга н ическом ра ст ворит еле или кислого извлечен ия из м очи, п од су ш ива ю т , за т ем н а сла ива ю т 1-3 ка п ли 1%-н ого сп иртового ра ст вора н ит ра т а коба ль т а С о(NO3)2, п од су ш ива ю т и вн осят бу м а гу в п а ры 25%-н ого ра ст вора а м м иа ка – п ят н о п риобрет а ет кра сн о-ф иолетовое окра ш ива н ие. М икрокрист а ллоскопич е ска я ре а кция : к су хом у ост а т ку н а п ред м ет н ом ст екле д оба вляю т од н у ка п лю 10%-н ого ра ст вора а м м иа ка , а п осле ра ст ворен ия ост а т ка од н у ка п лю 10%-н ого ра ст вора серн ой кислоты . Ч ерез 10-15 м ин у т н а блю д а ю т ха ра кт ерн ы е срост ки криста ллов. А л к ал оиды груп п ы оп ия И з олирова н ие . 20 м л м очи п од кисляю т 6 М НСl д о рН 2 и гид ролизу ю т н а вод ян ой ба н е в течен ие 20 м ин у т . Г ид ролиза т охла ж д а ю т , д оба вляю т 10%н ы й ра ст вор а м м иа ка д о рН 9,0-9,5. Э кст ра гиру ю т 2 ра за в т ечен ие 5 м ин у т д войн ы м количест вом см еси хлороф орм – бу т а н ол (9:1). От д еляю т орга н ический слой, объ ед ин яю т оба извлечен ия д ля д а ль н ейш его исслед ова н ия.
34
Филь т ру ю т через бу м а ж н ы й ф иль т р с безвод н ы м су ль ф а т ом н а трия и вы п а рива ю т в ф а рф оровой ча ш ке. Хром а т огра фич е ска я оч ист ка и обн а руже н ие . С ист ем а д ля хром а тогра ф ирова н ия: этила цет а т – эта н ол (м ета н ол) – а м м иа к (17: 2: 1). В ка чест ве м ет чиков н а н осят ра ст воры м орф ин а , код еин а , н а ркотин а , п а п а верин а . Длин а п робега – 10 см . Р е а ге н т ы , использ уе м ы е для проя вле н ия пла ст ин ки. 1. Реа кт ив М а рки. 2. Реа кт ив Фред е. Реа кт ивы н а н осят ка п ель н о от ст а рт а д о ф ин иш а сн а ча ла в зон у м ет чиков, а за т ем в исслед у ем ы е зон ы . Соед ин ен ие М орф ин К од еин На ркот ин Па п а верин Ом н оп он Г ероин
с реа кт ивом М а рки кра сн о-ф иолетовое ф иолет овое ф иолет овое ф иолет овое кра сн о-ф иолетовое кра сн о-ф иолетовое
Окра ш ива н ие с реа кт ивом Фред е ф иолет овое ф иолет ово-зелен ое син е-зелен ое син е-зелен ое ф иолет овое ф иолет овое
М икрокрист а ллоскопич е ские ре а кции. С у хой ост а т ок н а п ред м ет н ом ст екле ра ст воряю т в ка п ле 0,1 М ра ст вора солян ой кислоты и д оба вляю т ка п лю реа ген т а . М орфин 1. Реа кция с иод ид ом ка лия, KI, 15%-н ы й ра ст вор. На блю д а ет ся обра зова н ие белого оса д ка , сост оящ его из бесцветн ы хигл, собра н н ы хв п у чки. Пред ел обн а ру ж ен ия: 2,5 м кг м орф ин а . 2. Реа кция с хлорид ом рт у т и, HgCl2, 5%-н ы й ра створ. На блю д а ю т ся ха ра кт ерн ы е п у чки из игл. 3. Реа кция с соль ю Рейн еке. Обра зу ет ся сирен евы й оса д ок, сод ерж а щ ий крист а ллы в вид е срост ков из п у чков т он кихигл. Пред ел обн а ру ж ен ия: 2 м кг м орф ин а . Коде ин 1. Реа кция с ра ст вором п икрин овой кислот ы . При соед ин ен ии ка п ель исслед у ем ого ра ст вора и н а сы щ ен н ого ра ст вора п икрин овой кислоты обра зу ет ся ж елт ы й а м орф н ы й оса д ок, кот оры й п ри ст оян ии ста н овит ся крист а ллическим . На блю д а ю т ся крист а ллы д ву х вид ов: ж елты е сф ероид ы и п у чки из блед н о-ж елты хп ла стин ок. Пред ел обн а ру ж ен ия: 1 м кг код еин а . 2. Реа кция с хлорид ом рт у т и, HgCl2, 5%-н ы й ра створ. При п отира н ии п ред м ет н ого ст екла в обла ст и ка п ель ст еклян н ой п а лочкой вы д еляет ся крист а ллический оса д ок из иглообра зн ы хи п ла стин ча т ы х крист а ллов. Пред ел обн а ру ж ен ия: 13 м кг код еин а .
35
П роизводны е1,4-бензодиазеп ина I.И з олирова н ие . 20 м л м очи п од щ ела чива ю т NaOH д о рН 10. Э кстра гиру ю т д ва ж д ы хлороф орм ом д войн ы м объ ем ом . Орга н ический ра ст ворит ель у п а рива ю т в т оке т еп лого возд у ха . Хром а т огра фич е ска я оч ист ка и обн а руже н ие . С ист ем а д ля хром а тогра ф ирова н ия - хлороф орм – д иокса н – а цетон – 25%-н ы й ра ст вор а м м иа ка (45:47,5:5:2,5). Р е а ге н т ы , использ уе м ы е для проя вле н ия пла ст ин ки. Проявляю т п ла стин ку реа кт ивом Дра ген д орф а . Производ н ы е 1,4бен зод иа зеп ин а обн а ру ж ива ю тся в вид е ора н ж ево-коричн евы хп ят ен . Вслед ст вие особен н ост ей ра сп ред елен ия и м ета болизм а п роизвод н ы х1,4бен зод иа зеп ин а , их оп ред елен ие целесообра зн о п ровод ит ь п о п род у кт а м их гид ролиза – а м ин обен зоф ен он а м . Э т о п озволяет оп ред елять общ ее количество п реп а ра тов (ка к су м м у н а т ивн ого соед ин ен ия и его м ет а болитов) в биологической ж ид кост и. II.И з олирова н ие . К 10 м л а н а лизиру ем ой м очи или 2 м л крови д оба вляю т соот вет ст вен н о 10 м л и 2 м л кон цен трирова н н ой НСl и н а грева ю т в колбе с обра тн ы м холод иль н иком н а кип ящ ей вод ян ой ба н е в т ечен ие 1 ча са (кислот н ы й гид ролиз). По окон ча н ии реа кции гид ролиза т н ейтра лизу ю т н а сы щ ен н ы м ра ст вором NaOH, д овод ят рН д о 8-10 и экст ра гиру ю т д ва ж д ы хлороф орм ом (10 м л х2 д ля м очи и 5 м л х 2 д ля крови). Слой орга н ического ра ст ворит еля отд еляю т н а д елит ель н ой ворон ке, а за т ем в объ ед ин ен н ы х экст ра кт а х у п а рива ю т орга н ический ра створит ель п од стру ей т еп лого возд у ха д о объ ем а в н есколь ко ка п ель д ля Т СХ -а н а лиза и д осу ха д ля количест вен н ого оп ред елен ия. Хром а т огра фич е ска я оч ист ка и обн а руже н ие . Ост а т ок экст ра кт а п ерен осят н а ст а ртову ю лин ию п ла стин ки “Силу ф ол”. На т у ж е ст а рт ову ю лин ию н а н осят п ятн о м ет чиков, сост оящ ее из см еси бен зоф ен он ов, п роизвод н ы х 1.4-бен зод иа зеп ин а (10-15 м кг ка ж д ого). Пробег ф рон та ра ст ворит еля 10 см . Под виж н а я ф а за – бен зол. По окон ча н ии хром а тогра ф ирова н ия бен зол у д а ляю т с п ла ст ин ки током т еп лого возд у ха . При кон цен тра ции бен зоф ен он ов более 5 м кг/м л, ихм ож н о обн а ру ж ит ь п о собст вен н ой ж елт ой окра ске или ф лю оресцен ции в У Ф-свет е, п ри м ен ь ш их кон цен тра циях – п о ф лю оресцен ции в У Ф-свет е и реа кции окра ш ива н ия Бра т тон а -М а рш а лла . Р е а ге н т ы , использ уе м ы е для проя вле н ия пла ст ин ки. 1. Нит рит н а трия, NaNO2, свеж еп риготовлен н ы й 0,1%-н ы й ра ст вор. 2. Солян а я кислота , НСl, 2 М ра ст вор. 3. М очевин а , (NH2)2CO, н а сы щ ен н ы й ра ст вор (д ля у д а лен ия избы т ка н итрита н а трия). Пла ст ин ку оп ры скива ю т через 2 м ин у т ы . 4. N-2-н а ф т илэтилен д иа м ин д ихлорид (или щ елочн ой ра ст ворβ-н а ф т ола ). В м ест е лока лиза ции а м ин обен зоф ен он ов п оявляет ся ора н ж ево-кра сн ое окра ш ива н ие.
36
П роизводны еф енотиазина П ре два рит е льн а я проба . К 2 м л м очи п риба вляю т 1 м л реа кт ива FРN. При н а личии в исслед у ем ой п робе п роизвод н ы х ф ен от иа зин а м гн овен н о ра звива ется окра ш ива н ие от розового д о син его в за висим ост и от ст ру кт у ры и количест в соед ин ен ий в исслед у ем ой п робе. Проба с реа кт ивом FРN н е сп ециф ичн а и им еет т оль ко от рица т ель н ое зн а чен ие. При от рица тель н ом резу ль т а т е п робы д а ль н ейш ее исслед ова н ие м очи н а н а личие п роизвод н ы хф ен отиа зин а н е п ровод ит ся. И з олирова н ие . 5-10 м л м очи или 2 м л крови п од щ ела чива ю т 50%-н ы м ра ст вором ед кого н а т ра д о рН 13 и см есь кип ятят в т ечен ие 10 м ин у т н а вод ян ой ба н е. Полу чен н ы й гид ролиза т охла ж д а ю т д о ком н а т н ой т ем п ера т у ры и д ва ж д ы (п о 20 м л) экстра гиру ю т н -геп т а н ом , сод ерж а щ им 3%-н ы й изоа м иловы й сп ирт. Г еп та н овы е извлечен ия из м очи объ ед ин яю т, п ром ы ва ю т вод ой, н а сы щ ен н ой геп т а н ом , и д елят н а д ве ра вн ы е ча ст и. В од н ой ча сти п ровод ит ся обн а ру ж ен ие п роизвод н ы х ф ен от иа зин а м етод ом тон кослойн ой хром а тогра ф ии, а в д ру гой – количествен н ое оп ред елен ие. Э кст ра кт из крови п олн ость ю ра сход у ет ся н а количест вен н ое оп ред елен ие, т а к ка к сод ерж ит м ен ь ш ее количест во соэкст ра гиру ем ы х вещ ест в. Хром а т огра фич е ска я оч ист ка и обн а руж е н ие . Из а ликвоты орга н ического экст ра кт а у д а ляю т в т оке т еп лого возд у ха орга н ический ра ст ворит ель . С у хой ост а ток ра створяю т в 0,2-0,5 м л хлороф орм а и п олу чен н ы й ра ст ворп оровн у н а н осят н а д ве п ла стин ки “Cилу ф ол”. В ка честве м ет чиков н а н осят а м ин а зин (обяза т ель н о) и т е п роизвод н ы е ф ен от иа зин а , кот оры е бы ли обн а ру ж ен ы в п роцессе п ред ва рит ель н ого исслед ова н ия (Т СХ скрин ин г). Х ром а т огра ф ирова н ие п ровод ят в сист ем е 1 и 2. Длин а п робега – 10 см . Сист ем а –1: бен зол – д иокса н – 25%-н ы й ра ст вора м м иа ка (60 : 35 : 5). Сист ем а –2: этила цет а т –- а цетон – 25%-н ы й ра ст вора м м иа ка в эт а н оле (1:1) (50 : 45 : 4). Р е а ге н т ы , использ уе м ы е для проя вле н ия пла ст ин ки. Од н у п ла стин ку оп ры скива ю т ра ст вором кон цен трирова н н ой серн ой кислот ы в эта н оле (1:9) и п ри п олож итель н ом резу ль т а т е н а вт орой п ла ст ин ке обн а ру ж ен ие п ровод ят с п ом ощ ь ю реа кт ива М а рки. Ниж е п ривед ен ы величин ы и окра ски п ят ен н екоторы х п роизвод н ы х ф ен от иа зин а .
37
Реа кция окра ш ива н ия Соед ин ен ие кон ц.Н2SO4 – реа кт ив эт а н ол (1:9) М а рки т ем н от ем н оАм ин а зин кра сн ое кра сн ое т ем н от ем н оДип ра зин кра сн ое кра сн ое кра сн ое кра сн ое Проп а зин голу бое голу бое Л евом еп ром а зин Т риф та зин кра сн ое кра сн ое Э т а п ера зин т ем н от ем н окра сн ое кра сн ое Френ олон кра сн ое кра сн ое
С ист ем а -1 RSt (п о а м ин а зин у ) 1,00
Сист ем а -2 RSt (п о а м ин а зин у ) 1,00
0,74
2,95
1,29 1,56 0,48 0,34
1,08 1,87 0,26 0,48
1,71
3,21
К аннабиноиды Осн овн ы м и ком п он ен т а м и, оп ред еляем ы м и в биож ид костях, являю т ся: Δ -т етра гид рока н н а бин ол, Δ 8-тет ра гид рока н н а бин ол, ка н н а бин ол, ка н н а бид иол. От бор пробы осу щ ест вляет ся п ротира н ием ру к п од озрева ем ого в ку рен ии га ш иш а ва т н ы м или м а рлевы м т а м п он ом , см очен н ы м этиловы м сп иртом . С п ирт из обра зцов исп а ряю т п ри ком н а т н ой т ем п ера т у ре, а т а м п он ы у п а ковы ва ю т в п олиэтилен овы е п а кет ы и н а п ра вляю т н а исслед ова н ие в ла бора торию . И з олирова н ие . К а н н а бин оид ы экст ра гиру ю т из м а т ериа ла т а м п он а д ва ра за д иэтиловы м эф иром п орциям и п о 10 м л в т ечен ие 1 м ин . Э кст ра кт у п а рива ю т д о кон ечн ого объ ем а 0,1-0,3 м л и исп оль зу ю т ка к д ля п ред ва ритель н ого оп ред елен ия ка н н а бин оид ов ха ра ктерн ы м и цветн ы м и реа кциям и, та к и д ля ка чест вен н ого оп ред елен ия их м етод ом тон кослойн ой хром а тогра ф ии. Для пре два рит е льн ого иссле дова н ия от бира ю т 5 м кл от а ликвоты у п а рен н ого д о м а лого объ ем а экст ра ткт а , н а н осят п робу н а ф иль трова ль н у ю бу м а гу , вы су ш ива ю т и за тем оп ры скива ю т 0,5%-н ы м ра ст вором п рочн ого син его Б в 10%-н ом вод н ом ра ст воре ка рбон а т а н а трия. От су т ст вие ора н ж евого окра ш ива н ия п ят н а слу ж ит осн ова н ием д ля за клю чен ия, что в п робе н е обн а ру ж ен ы ка н н а бин оид ы . При п оявлен ии ора н ж евого окра ш ива н ия втору ю а ликвот у экст ра кт а н а н осят н а п ла ст ин ку “Силу ф ол”. Хром а т огра фич е ска я оч ист ка и обн а руже н ие . Х ром а тогра ф ирова н ие осу щ ест вляет ся в сист ем е п ет ролейн ы й эф ир-д иэт иловы й эф ир(4:1) д ву кра т н о. Вы явлен ие п ят ен осу щ ест вляет ся оп ры скива н ием хром а тогра м м ы 0,5%-н ы м ра ст вором п рочн ого син его Б в 10%-н ом ра ст воре ка рбон а т а н а трия. При этом в осн овн ом вы являет ся ка н н а бин ол (Rf = 0,76) и т ет ра гид рока н н а бин ол (Rf = 0,84). 9
38
След у ет им ет ь в вид у , чт о обн а ру ж ен ие т ет ра гид рока н н а бин ола т оль ко в см ы ва хс кож и ру к н е являет ся осн ова н ием д ля за клю чен ия, чт о д а н н ое лицо ку рило га ш иш , п осколь ку возм ож н о слу ча йн ое соп рикосн овен ие с га ш иш ем , о кот ором освид ет ель ст ву ем ы й и н е п од озрева л. В ы я вле н ие ка н н а бин оидов в слюн е курильщика га ш иш а . От бор проб. У лиц, п од озрева ем ы х в ку рен ии га ш иш а , в склян ку с п рит ерт ой п робкой вм естим ост ь ю 100 м л от бира ю т п рим ерн о 10 м л слю н ы , п осле чего п ром ы ва ю т п олост ь рт а 50 м л 70%-н ого этилового сп ирт а , которы й н а сы щ ен хлорист ы м н а т рием (п ослед н ий ввод ят д ля п ред у п реж д ен ия глота н ия сп ирта ). Слю н у и см ы в объ ед ин яю т , склян ку за кры ва ю т , оп еча ты ва ю т и н а п ра вляю т н а исслед ова н ие в ла бора т орию . И з олирова н ие . Полу чен н у ю п робу см еш ива ю т с 50 м л н а сы щ ен н ого вод н ого ра ст вора хлорид а н а трия. Э кст ра гиру ю т ка н н а бин оид ы 10 м л эт ила цет а та . Врем я экстра кции – 5 м ин . Ч исло экст ра кций – 3. Э кст ра кт вы су ш ива ю т п у т ем д оба влен ия 1-1,5 г безвод н ого су ль ф а т а н а трия. За т ем ф иль т ру ю т экст ра кт через бу м а ж н ы й ф иль т р и у п а рива ю т д о н есколь ких ка п ель . Хром а т огра фич е ска я оч ист ка и обн а руже н ие Весь п олу чен н ы й ра ст вор н а н осят н а п ла стин ку “С илу ф ол”. Х ром а т огра ф ирова н ие осу щ ест вляет ся в у словиях, оп иса н н ы хвы ш е. При эт ом след у ет у чит ы ва т ь , чт о отрица т ель н ы й резу ль т а т ещ е н е являет ся осн ова н ием д ля вы вод а , что д а н н ое лицо н е у п от ребляло га ш иш , т а к ка к след ы га ш иш а п осле его ку рен ия сохра н яю тся в п олост и рт а д о 1 ча са , а н а кож е – д о 24 ча сов (если п оверхн ост ь кож и н е п од верга ла сь п рот ира н ию ра ст ворит елям и т ип а од еколон а , эт илового сп ирт а ). В ы я вле н ие ка н н а бин оидов в пла з м е крови. 5 м л п ла зм ы крови экстра гиу ю т чет ы рехкра т н о п о 5 м л см еси п ет олейн ого эф ира , сод ерж а щ его 1,5% п ен т а н ола п о объ ем у . Объ ед ин ен н ы й орга н ический экст ра кт у п а рива ю т д о объ ем а н есколь кихка п ель и п ерен осят н а п ла ст ин ку “Силу ф ол”. Х ром а тогра ф иру ю т в т ехж е у словиях, чт о и экст ра кт из слю н ы . К ок аин И з олирова н ие . 5 м л крови экстра гиру ю т 15 м л н -бу т илхлорид а . Орга н ическу ю ф а зу от д еляю т , д оба вляю т к н ей 10 м л 0,1 М НCl, вст ряхива ю т в т ечен ие 5 м ин . От д еляю т вод н у ю ф а зу (орга н ическу ю от бра сы ва ю т ) и п рилива ю т к н ей 10%-н ы й ра ст вора м м иа ка д о рН 10. В д елитель н у ю ворон ку п ом ещ а ю т п од щ елочен н у ю вод н у ю ф а зу и д ва ж д ы экст ра гиру ю т п о 5 м л хлороф орм ом . Объ ед ин ен н ы й хлороф орм н ы й экст ра кт у п а рива ю т д о объ ем а 0.5 м л в т оке т еп лого возд у ха . 50 м л м очи п од кисляю т HCl д о рН 2 и экст ра гиру ю т 50 м л эф ира д ля у д а лен ия кислы хи н ейтра ль н ы хсоед ин еий. К ока ин и его м ет а болиты ост а ю тся в осн овн ом в вод н ой ф а зе. Вод н у ю ф а зу п од щ ела чива ю т 25%-н ы м ра ст вором
39
а м м иа ка д о рН 10. Э кст ра кцию п роизвод ят ра вн ы м объ ем ом см еси хлороф орм изоп оп а н ол (3:1) д ва ж д ы . Объ ед ин ен н ы й экст ра кт у п а рива ю т д осу ха . Хром а т огра фич е ска я оч ист ка и обн а руже н ие . С у хой ост а ток ра ст воряю т в 0,2 м л хлороф орм а и п оловин у объ ем а н а н осят н а ст а ртову ю лин ию п ла стики ВЭ Т СХ . В ка чест ве м ет чиков исп оль зу ю т см есь кока ин а и бен зоилэкгон ин а . Х ром а т ога ф иру ю т в систем е хлороф орм – м ет а н ол (50:50). Длин а п робега – 10 см . Р е а ге н т ы , использ уе м ы е для проя вле н ия пла ст ин ки. Сн а ча ла п ла ст ин ку оп ры скива ю т реа ктивом Дра ген д орф а , за т ем иод п ла тин а т ом . Ид ен тиф ика цию п ровод ят п о совп а д ен ию величин Rf исслед у ем ы хсоед ин ен ий и м ет чиков. При п олож ит ель н ой п робе ост а вш у ю ся а ликвот у ра ст вора хром а т огра ф иру ю т в систем е эт ила цет а т -циклогекса н м ет а н ол-а м м иа к (70:15:10:5) или эт ила цет а т – м ет а н ол (80:20)и п ровод ят м икрокрист а ллоскоп ические реа кции. М икрокрист а ллоскопич е ские ре а кции. 1. Реа кция с ра ст вором п ла т ин охлористовод ород н ой кислоты . Соед ин яю т н а п ред м ет н ом ст екле ка п ли исслед у ем ого ра ст вора и 10%н ы й ра ст вора п ла тин охлористовод ород н ой кислоты . Из кон цен трирова н н ы х ра ст воров соли кока ин а сра зу ж е вы п а д а ю т п ерист ы е д ен д рит ы , а из ра зба влен н ы х – крист а ллы в вид е ш т ы ков. Пред ел обн а ру ж ен ия – 3,3 м кг кока ин а . 2. Реа кция с ра ст вором п ерм а н га н а т а ка лия. К кру п ин ке хлористовод ород н ой соли кока ин а п риба вляю т н а п ред м етн ом ст екле ка п лю 1%-н ого ра ст вора п ерм а н га н а т а ка лия. При п отира н ии стеклян н ой п а лочкой в обла сти исслед у ем ой ка п ли и д оба влен ии реа кт ива вы д еляю т ся кра сн о-ф иолетовы е п рям оу голь н ы е и ква д ра т н ы е п ла ст ин ки. Пред ел обн а ру ж ен ия - 4 м кг. А м итрип тил ин И з олирова н ие . 5 м л крови или 50 м л м очи п од щ ела чива ю т 50%-н ы м ра ст вором ед кого н а т ра д о рН 9-10 и п роизвод ят экст ра кцию д иэт иловы м эф иром д ва ж д ы п о 20 м л. Э ф ирн ы е извлечен ия объ ед ин яю т , объ ем д овод ят в м ерн ой колбе ем кост ь ю 50 м л д о м етки, д елят н а а ликвот ы соот вет ст вен н о 10,10,10 и 20 м л, п ом ещ а ю т в стеклян н ы е ст а ка н чики, у п а рива ю т д осу ха . Хром а т огра фич е ска я оч ист ка и обн а руже н ие а м ит рипт илин а . Оста т ки в ст еклян н ы хста ка н чика хколичест вен н о с п ом ощ ь ю хлороф орм а п ерен осят н а ст а ртову ю лин ию п ла стин ки “Cилу ф ол”, н а н ося п олоса м и (д лин а 1-2 см ). В ка чест ве м етчика н а п ла стин ку н а н осят 5-10 ка п ель ст а н д а рт н ы х хлороф орм н ы х ра ст воров а м итрип тилин а -осн ова н ия и н ортрип тилин а осн ова н ия (0,5 м г/м л) и п ла ст ин ку хром а т огра ф иру ю т в сист ем е бен зол-а цетон (80:20) д о п род виж ен ия ф рон та ра ст ворит елей н а 10 см . После вы су ш ива н ия п ла ст ин ку хром а т огра ф иру ю т в сист ем е бен зол-д иокса н -а м м иа к (60:35:5) д о п род виж ен ия ф рон та ра створит елей н а 10 см . Х ром а т огра м м у вы су ш ива ю т н а возд у хе и в зон а х м ет чиков и п ервой п олосы (а ликвот а соот в.10 м л),
40
д ет ект иру ю т (ка п ель н о) кон цен трирова н н ой серн ой кислотой. При н а личии а м итрип т илин а н а блю д а ет ся п ят н о ярко-ора н ж евого цвета н а у ровн е м ет чика с Rf =0,74-0,78, в слу ча е н ортрип т илин а п роявляется п ятн о ора н ж евого или ж елтого (в за висим ост и от кон цен тра ции) цвет а с Rf=0,38-0,46. От кры ва ем ы й м ин им у м – 0,2 м кг а м итрип т илиа -осн ова н ия и н ортрип т илин а -осн ова н ия в п робе. При от су т ст вии н а хром а тогра м м е п ятн а с Rf=0,74-0,78 д а ю т за клю чен ие о н еобн а ру ж ен ии а м ит рип т илин а . При н а личии н а хром а т огра м м е п ят ен с Rf=0,74-0,78 и Rf=0,38-0,46, п а ра ллель н ы х м етчика м а м итрип тилин а и н ора м итрип т илин а , п роизвод ят д а ль н ейш ее исслед ова н ие извлечен ия. Неп роявлен н ы е у ча ст ки силика геля, п а ра ллель н о п роявлен н ы м п ятн а м а м итрип т илин а и н ортрип тилиа , п ерен осят с п ом ощ ь ю ска ль п еля в 3 п робирки с п рит ерт ы м и п робка м и и д оба вляю т п о 10 м л хлороф орм а . См есь вст ряхива ю т , от ст а ива ю т и ж ид кость д ека н т а цией слива ю т через стеклян н ы й ф иль т р в ст еклян н ы й ста ка н чик д ля исслед ова н ия. В п робирку вн овь д ва ж д ы н а лива ю т п о 10 м л хлороф орм а и см есь т а кж е вст ряхива ю т и от ф иль тровы ва ю т . Полу чен н ы е хлороф орм н ы е ра ст воры д а лее исслед у ю т с п ом ощ ь ю цветн ы хи м икрокрист а ллоскоп ическихреа кций. Р е а кции окра ш ива н ия . Ост а ток, п олу чен н ы й п осле у д а лен ия хлороф орм а , соот вет ст ву ю щ ий 20 м л эф ирн ого извлечен ия, ра ст воряю т в 2 м л хлороф орм а и п о н есколь ко ка п ель п ом ещ а ю т в 3 ф а рф оровы е ча ш ки и н а од н о п ред м етн ое ст екло. К су хим ост а тка м в ф а рф оровы х ча ш ка х д оба вляю т п о 2 ка п ли кон цен трирова н н ой серн ой кислоты , реа кт ива Фред е, реа кт ива М а рки (в од н у ча ш ку – од ин реа ген т ). При н а личии а м ит рип т илин а и н орт рип т илин а н а блю д а ет ся ж елто-ора н ж евое окра ш ива н ие. Ч у вст вит ель н ость реа кций- от 0.1 д о 1,0 м кг в п робе. М икрокрист а ллоскопич е ска я ре а кция . К су хом у ост а т ку н а п ред м етн ом ст екле д оба вляю т 1 ка п лю 0,1%-н ого ра ст вора и 1 ка п лю 0,1%-н ого ра ст вора соли Рейн еке. При н а личии а м ит ритилин а н а блю д а ет ся обра зова н ие слож н ы х крист а ллов в вид е сросш ихся у осн ова н ия игл. Ч у вст вит ель н ость реа кции 0,02 м кг в п робе. При н а личии в п ят н е н орт рип тилин а н а блю д а ет ся обра зова н ие крист а ллов в вид е вет очек. Ч у вст витель н ост ь реа кции – 0,01 м кг в п робе. Д им едрол И з олирова н ие . К 10 м л м очи или 2 м л крови д оба вляю т вод н ы й ра ст вор а м м иа ка д о рН 10 и экст ра гиру ю т д им ед рол д ву хкра т н ы м объ ем ом хлороф орм а . Х лороф орм н у ю ф а зу от д еляю т и у п а рива ю т хлороф орм (экст ра кт н е д олж ен вскип а ть !) д о объ ем а н есколь ких ка п ель (д ля Т СХ ) и д осу ха п ри количест вен н ом оп ред елен ии. Хром а т огра фич е ска я оч ист ка и обн а руже н ие . У п а рен н ы й экст ра кт н а н осят н а ст а ртову ю лин ию п ла стин ки “Силу ф ол”. Ряд ом п ом ещ а ю т п ятн о
41
м ет чика и хром а т огра ф иру ю т в сист ем е хлороф орм -а цетон -а м м иа к (12:24:1). Длин а п робега – 10 см . Обн а ру ж ен ие п ровод ят кон цен трирова н н ой серн ой кислот ой. От м еча ю т п оявлен ие окра ш ен н ы хп ятен . Rf сост а вляет 0,67-0,68. П ром едол И з олирова н ие . 50 м л м очи д овод ят д о рН 11-13 0,1 М ра створом NaOH и т риж д ы экстра гиру ю т хлороф орм ом п о 45, 40 и 25 м л. Объ ед ин ен н ы е хлороф орм н ы е извлечен ия ф иль тру ю т через ф иль т р, см очен н ы й хлороф орм ом и орга н ический ра створит ель у д а ляю т в исп а рит ель н ой ча ш ке д осу ха . Хром а т огра фич е ска я оч ист ка и обн а руже н ие . С у хой ост а ток ра ст воряю т в хлороф орм е. Полу чен н ы й ра ст ворд елят н а д ве ра вн ы е ча ст и. На ст а ртову ю лин ию хром а тогра ф ической п ла ст ин ки с за креп лен н ы м слоем силика геля н а н осят в д ве п олосы экстра кт ы 1 и 2 и ряд ом ра ст вор м етчика (ст а н д а рт н ы й ра створ п ром ед ола осн ова н ия в хлороф орм е). В ка чест ве п од виж н ой ф а зы исп оль зу ю т хлороф орм , кот оры й п ом ещ а ю т в ка м еру объ ем ом 500 см 3, н а д н о кот орой п ом ещ а ет ся бю кс или т игель , сод ерж а щ ий 5 м л 25%-н ого ра ст вора а м м иа ка . На сы щ а ю т в т ечен ие 30 м ин у т . Длин а п робега – 10 см . Р е а ге н т ы , использ уе м ы е для проя вле н ия пла ст ин ки. Од н у из зон оп ры скива ю т реа кт ивом Дра ген д орф а . При н а личии п ром ед ола н а блю д а ет ся ора н ж евое п ятн о. Во второй зон е и зон е м ет чика п ром ед ол обн а ру ж ива ет ся ка п ель н о с п ом ощ ь ю реа кт ива М а рки (п у рп у рн о-кра сн ое окра ш ива н ие). Пред ел обн а ру ж ен ия – 0,25 м кг. М икрокрист а ллич е ска я ре а кция с а лиз а рин овы м кра сн ы м . Ора н ж евое п ятн о, п олу чен н ое п осле обра бот ки реа кт ивом Дра ген д орф а , сн им а ю т с п ом ощ ь ю ска ль п еля в п робирку , сод ерж а щ у ю 5 м л см еси эт а н ола 25%-н ого ра ст вора а м м иа ка (9:1). После вст ряхива н ия см еси в т ечен ие 1 м ин у т ы п олу чен н ы й ра ст вор от д еляю т ф иль трова н ием через ст еклян н ы й ф иль т р. Ра ст ворит ель у д а ляю т , а ост а ток п ерен осят с п ом ощ ь ю хлороф орм а н а п ред м етн ое ст екло. К су хом у ост а т ку д оба вляю т 1 ка п лю 0,1 М ра ст вора HCl и вн осят 1-2 крист а лла кра сителя а лиза рин ового кра сн ого. При н а личии п ром ед ола (через 5-10 м ин у т ) обра зу ю т ся иголь ча т ы е криста ллы ж елт ого цвет а . Эф едрин, эф едрон П ре два рит е льн ое иссле дова н ие . К 1 м л м очи д оба вляю т крист а ллический су ль ф а т н а т рия д о н а сы щ ен ия и за тем п о 0,5 м л сероу глерод а в бен золе и а м м иа ка т м ед и. Полу чен н у ю см есь вст ряхива ю т в течен ие 30 м ин . В эт их у словиях эф ед рин и эф ед рон обра зу ю т ком п лексн ое соед ин ен ие с м ед ь ю , сод ерж а щ ееся в верхн ем орга н ическом слое. Орга н ическу ю ф а зу от бира ю т, а вод н у ю п ром ы ва ю т 1 м л бен зола . Объ ед ин ен н ы е орга н ические экстра кты
42
у п а рива ю т в т оке холод н ого возд у ха д о объ ем а 50-100 м кл. У п а рен н ы й экст ра кт количест вен н о н а н осят п олосой 3 см н а лин ию ст а рт а п ла стин ки “Cилу ф ол-У Ф-354”. В ка чест ве м ет чиков исп оль зу ю т ком п лексы эф ед рон а и эф ед рин а с м ед ь ю в кон цен тра ции 1 м г/ м л, п ригот овлен н ы е из чист ы х су бста н ций. Х ром а тогра ф ирова н ие п ровод ят в систем е хлороф орм – а цет он (48:2) – д ля эф ед рин а и в сист ем е циклогекса н -а цет он -м ет а н ол (40:10:2) –д ля эф ед рон а . Rf (эф ед рин а ) –0,26; Rf (эф ед рон а )-0,27. Длин а п робега ра створит еля 10 и 15 см соответ ст вен н о. Пла стин ку п росу ш ива ю т и п росм а т рива ю т в У Ф-свет е. Ж елтокоричн евое окра ш ива н ие и совп а д ен ие величин Rf с м ет чика м и слу ж ит п олож ит ель н ой реа кцией и осн ова н ием д ля п ровед ен ия д оп олн ит ель н ого исслед ова н ия. При отрица т ель н ом резу ль т а т е н а эф ед рин и эф ед рон д а ль н ейш ее исслед ова н ие н е п ровод ит ся. И з олирова н ие . 10 м л биологической п робы (м очи) д овод ят д о рН 10 ра ст вором ка рбон а та н а трия и триж д ы экст ра гиру ю т хлороф орм ом п о 10 м л. Объ ед ин ен н ы е хлороф орм н ы е извлечен ия ф иль тру ю т через ф иль т р, см очен н ы й хлороф орм ом , и орга н ический ра ст ворит ель у д а ляю т в вы п а рит ель н ой ча ш ке д осу ха . Хром а т огра фич е ска я оч ист ка и обн а руже н ие . Оста т ок ра ст воряю т в 0,5 м л хлороф орм а и н а н осят н а п ла ст ин ку “Силу ф ол”, в ка чест ве м ет чиков исп оль зу ю т эф ед рин , эф ед рон и ф ен а м ин в вид е осн ова н ий. Х ром а тогра ф ирова н ие п ровод ят в сист ем е бен зол – эта н ол – д иэт ила м ин (9 :1: 1). Длин а п робега 10 см . После хром а т огра ф ирова н ия п ла стин ку су ш а т в п отоке т еп лого возд у ха и оп ры скива ю т свеж еп риготовлен н ы м ра ст вором н ин гид рин а в а цет он е. За т ем п ла стин ку н а грева ю т в су ш иль н ом ш ка ф у п ри 801000С или в т оке т еп лого возд у ха . При н а личии в п робе исслед у ем ы хвещ еств обра зу ю т ся т ем н о-ф иолет овы е п ятн а с соот вет ст ву ю щ им и зн а чен иям и м ет чиков (эф ед рин , эф ед рон ). М икрокрист а ллоскопич е ские ре а кции. Э федрин гидрохлорид 1. Реа кция с иод висм у т а т ом ка лия. При вза им од ейст вии ка п ель ра ст воров эф ед рин а гид рохлорид а и иод висм у т а т а ка лия через 10 м ин у т н а блю д а ется вы п а д ен ие крист а ллического оса д ка , сост оящ его из крист а ллов д ву х вид ов: т ем н о-кра сн ы х игл и т он ких ора н ж евы хп ла стин ок. Пред ел обн а ру ж ен ия: 1 м кг эф ед рин а . 2. Реа кция с соль ю Рейн еке. При вза им од ействии ка п ель ра ст вора эф ед рин а гид рохлорид а и 1%-н ого свеж еп ригот овлен н ого ра ст вора соли Рейн еке вы п а д а ет крист а ллический оса д ок, состоящ ий из тон ких п ла стин ок п рям оу голь н ой ф орм ы . Пред ел обн а ру ж ен ия: 7 м кг эф ед рин а .
43
ЛИ Т Е РА Т У РА 1. Е рем ин С.К . Ан а лиз н а ркот ических сред ст в : ру ковод ст во п о хим икот оксикологическом у а н а лизу н а ркот ических и д ру гих од у рм а н ива ю щ их вещ ест в / С.К . Е рем ин , Б.Н. Изотов, Н.В. Веселовска я. – М . : М ы сль , 1993. 2. Изотов Б.Н. Нен а п ра влен н ы й а н а лиз н а вещ ест ва , изолиру ем ы е экст ра кцией п олярн ы м и ра ст ворит елям и / Б.Н. Изотов. – М . : М ед ицин а , 1996. 3. Веселовска я Н.В. На ркотики. Свойст ва , д ейст вие. Фа рм а кокин ет ика . М ет а болизм / Н.В. Веселовска я [и д р.]. – М ., 2002. 4. С им он ов Е .А. На ркот ики. М ет од ы а н а лиза н а кож е в ее п рид а т ка х и вы д елен иях/ Е .А. Сим он ов, Б.Н. Изот ов, А.В.Фесен ко. – М . : Ан а ха рсис, 2000. 5. Х им ико-т оксикологический а н а лиз вещ ест в, вы зы ва ю щ иход у рм а н ива н ие : м ет од ические у ка за н ия. – М . : М ЗCCCР, 1989. 6. Л у ж н иков Е .А. К лин ическа я токсикология / Е .А.Л у ж н иков. – М . : М ед ицин а , 1999. 7. К лин ическа я т оксикология д ет ей и п од рост ков : в 2-х т. / п од ред . И.В. М а рковой [и д р.]. – С.-Пб. : Ин т ерм ед ика , 1998. 8. Э н циклоп ед ия клин ическихла бора торн ы хт естов / п од ред . Н.Т ица . – М . : “Л а бин ф орм ”, 1997. 9. Ду н а евский В.В. На рком а н ии и т оксиком а н ии / В.В.Ду н а евский, В.Д.Стяж кин . – Л . : М ед ицин а . – 1990. 10. Ба ба ян Э .А. На ркология / Э .А.Ба ба ян , М .Х .Г он оп оль ский. – М . : М ед ицин а , 1987. 11. Л ичко А.Е . Под рост кова я н а ркология / А.Е .Л ичко, В.С.Битен ский. – М . : М ед ицин а , 1991. 12. К ра м а рен ко В.Ф. Т оксикологическа я хим ия / В.Ф. К ра м а рен ко. – К иев : Вы сш а я ш кола , 1989.
44
П РИ ЛО Ж Е Н И Е П риготовл ение реак тивов • Реа кт ив Дра ген д орф а . В 20 м л а зот н ой кислоты (ρ 1,18 г/ см 3) ра ст воряю т 8 г осн овн ого н итра т а висм у т а . Полу чен н ы й ра ст вор влива ю т в ра ст вор, сод ерж а щ ий 27,2 г иод ид а ка лия в 30 м л вод ы . Ч ерез н есколь ко д н ей ж ид кость ф иль тру ю т и ра зба вляю т вод ой д о 100 м л. • Реа кт ив Дра ген д орф а , м од иф ицирова н н ы й п о М у н ь е. В 10 м л лед ян ой у ксу сн ой кислоты ра ст воряю т 0,85 г осн овн ого н итра т а висм у т а и п риба вляю т 40 м л вод ы . К этой ж ид кости п риба вляю т ра ст вор, сод ерж а щ ий 8 г иод ид а ка лия в 20 м л вод ы . Перед у п от реблен ием беру т 1 м л у ка за н н ого ра ст вора , п риба вляю т к н ем у 2 м л лед ян ой у ксу сн ой кислоты и 10 м л вод ы . • Реа кт ив М а рки. К 1 м л кон цен т рирова н н ой серн ой кислот ы п риба вляю т ка п лю ф орм а лин а и охла ж д а ю т. Э т от реа кт ив исп оль зу ю т свеж еп ригот овлен н ы м . • Реа кт ив С им он а . Да н н ы й реа кт ив п олу ча ю т п ри см еш ива н ии ра вн ы х объ ем ов 10%-н ого ра ст вора а цет а ль д егид а и 1%-н ого ра створа н ит роп ру ссид а н а т рия. • Реа кт ив Фред е. К ра ст ерт ом у в п орош ок м олибд а т у а м м он ия (или н а т рия) п риба вляю т кон цен трирова н н у ю серн у ю кислот у . См есь ин т ен сивн о взба лты ва ю т. Полу чен н ы й н а сы щ ен н ы й ра ст вор м олибд ен овой кислоты в кон цен трирова н н ой серн ой кислот е слива ю т с оса д ка . Реа кт ив исп оль зу ю т свеж еп ригот овлен н ы м . При стоян ии реа кт ив м ож ет изм ен ят ь свою окра ску . • Реа кт ив Э рд м а н а . К 20 м л кон цен т рирова н н ой серн ой кислот ы п риба вляю т 10 ка п ель 15%-н ой а зот н ой кислоты и взба лты ва ю т . • Реа кт ив FPN. К 5 м л 5%-н ого ра ст вора хлорид а ж елеза (III) п риба вляю т 45 м л 20%-н ого ра ст вора хлорн ой кислоты и 50 м л 50%-н ого ра ст вора а зотн ой кислот ы . • С у ль ф а т рт у т и(II), 2%-н ы й ра ст вор. 5,0 г ж елтой окиси рт у т и ра ст воряю т в см еси 100 м л вод ы и 10 м л кон ц. H2SO4, охла ж д а ю т , д овод ят вод ой д о 250 м л. • Диф ен илка рба зон , 0,02%-н ы й ра ст вор. 0,02 г ДФК ра ст воряю т в 100 м л хлороф орм а .
45
М ин ист ерст во зд ра воохра н ен ия Российской Фед ера ции Г У ЗОНД
К од ф орм ы п о ОК У Д ____________ К од у чреж д ен ия п о ОК ПО ________ М ед ицин ска я д оку м ен та ция Форм а № 454 / у
РЕ ЗУ ЛЬ Т А Т Ы ХИ М И К О -Т О К СИ К О ЛО ГИ ЧЕ СК О ГО И ССЛЕ Д О В А Н И Я Х им ико-токсикологическа я ла бора тория ОНД, (а д рес) Ан а лиз № ________________ п Да т а п ровед ен ия исслед ова н ия _________________________________________ ФИО сп ециа лист а , п ровод ивш его исслед ова н ие __________________________ Исслед ова н ие п роизвед ен о п о н а п ра влен ию № ______ от ___________________ Л ичн ое за явлен ие ФИО освид етель ст ву ем ого_____________________________________________ К од п робы __________________________________________________________ Объ ект исслед ова н ия _________________________________________________ М ет од а н а лиза _______________________________________________________ Резу ль т а т _______________________________________________________ Под п ись _____________________ М .П.
46
Бю ро су д ебн о-м ед ицин ской эксп ертизы Ворон еж ского облзд ра вотд ела г.Ворон еж , у л.Феокт ист ова ,1
К од ф орм ы п о ОК У Д___________ К од ф орм ы п о ОК ПО___________ М ед ицин ска я д оку м ен т а ция Форм а 3 175/У У т верж д ен а М ин зд ра вом РФ
А К Т судебно-х им ическ ого иссл едования № ______________ На осн ова н ии отн ош ен ия____________________________________________
от
№
в хим ическом от д елен ии су д ебн о-м ед ицин ской ла бора тории
бю ро су д ебн о-м ед ицин ской эксп ертизы Ворон еж ского облзд ра вотд ела ,_____ эксп ертом -хим иком от д елен ия________________________________________
п роизвед ен о исслед ова н ие
Исслед ова н ие н а ча т о_______________________________________________ Исслед ова н ие за кон чен о_____________________________________________
Воп росы , п од леж а щ ие ра зреш ен ию п ри исслед ова н ии, и д ру гие ра зд елы “Акт а су д ебн о-хим ического исслед ова н ия” изла га ю т ся н а след у ю щ их ________________ листа х.
П РИ ЛО Ж Е Н И Е
47
Cост а вит ели: Е вст игн еева Ва лен тин а Пет ровн а Ш ку тин а Ирин а Викт оровн а Бреж н ева Т а т ь ян а Алекса н д ровн а Сливкин Алексей Ива н ович Селем ен ев Вла д им ирФед орович
Ред а кт ор
Т ихом ирова О.А.